去内毒素提质粒（小提）

huangcong1988

用ENDO-FREE的试剂盒提的，提的是14ml左右的，其中有一步枪没调，结果加N3 buffer 加少了，只加了130,（应该加250的），但是也出现了絮状沉淀，结果就不知道提出质粒了没，跑了个胶，结果条带很暗，是不是提出了质粒，但是浓度很低？那个N3作用是什么？沉淀质粒吗？加少了就导致提出的质粒量少吗？

军医

N3应该是沉淀菌内的蛋白，还可以中和P2中的碱性环境，少加N3最多可能导致提的质粒蛋白含量高些，质粒浓度应该不会受影响。

xiangchou812

N3成分是是醋酸钾和醋酸。目的就是中和2液中的NaOH。另外K+可以置换SDS中的Na+。形成沉淀。

huangcong1988

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哦，谢谢，中和作用是吧？还有沉淀蛋白吧？今天有点事情耽误了，本来打算测一下浓度看看，那个测浓度的机子可以OD280/OD260，想看看纯度，是低于1.8就有蛋白质污染是吧？

huangcong1988

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  Z) C* P6 N8 v- _: E非常谢谢

军医

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低于1.8是蛋白污染，N3是沉淀菌体蛋白。