哪位高人用流式分选过脐血CD34+细胞？~~紧急求助~~

青云之上

高人、老师好，有谁用流式分选过脐血CD34+细胞，可否告诉我具体操作步骤和所用培养基，从脐血收集、处理到分选，万分感激啊~~

goodboy

美天旎公司有相关的试剂盒，我之前也想分选的，不知道你为什么会选脐带血？除此之外外周血与骨髓也可以筛选。

青云之上

外周血估计量不如脐血吧？骨髓来源是不更不方便啊？？

仁心-妙术

流式分选细胞和免疫磁珠分选虽然细胞纯度高，但成本较高，对细胞活性影响较大。建议你考虑其他方法。

流泪的鱼

    首先，看你所要分选的CD34+细胞做什么？所用的流式若具有分选功能，则要严格无菌，但是这很难保证，我做过几次，分选完培养都污染。
0 M. m' _& J0 A: A    其次，根据你所要的细胞的用途，除了流式，你还可以用其他方法，我曾用过试剂盒法，当然也可以自己配试剂，但是一定要严格无菌。分离出来的细胞再用普通的流式细胞仪检测是不是CD34+细胞，这个方法推荐给你，值得一试！

青云之上

回复 仁心-妙术 的帖子
+ Q2 r8 U1 M& z0 I' `2 B  `+ q; q8 }$ w, R' u
谢谢，能具体些吗？如何操作？我现在就是不知道该怎么去弄啊，呵呵~~

青云之上

回复 流泪的鱼 的帖子) w& C' W. k" y4 @, m/ z
0 L# c; A( Y5 d, }8 Z
非常感谢你的回复。1 n" I  @% e: x( e* T2 `
首先，我要用CD34+细胞诱导iPS，我就是想知道从脐血如何去分选CD34+细胞，取来的脐血该如何处理，具体操作步骤？我们这边有人用流式分选细胞后培养，无菌情况还行。
7 ?6 p4 l) T+ h; }9 r( n# T' j其次，试剂盒和自己配试剂能否给我也具体讲讲啊，谢谢啊，呵呵，初级菜鸟，还请多包涵，多指教~~; D1 R' C( i, o7 ^3 O0 M
谢谢啊~~

流泪的鱼

对于你的实验，我考虑如下：第一，你的所选的脐血很关键，产妇的年龄？孕龄？脐血的体积是多少？你用什么容器装脐血？第二，若用山东威高的一次性采血袋最好，还有问题就是，采血袋里加什么抗凝剂？肝素还是枸橼酸钠？浓度是多少？

仁心-妙术

CD34+是造血干细胞表面抗原，可以通过密度梯度离心的方法提取单个核细胞，很经典的方法国内外文献用的都比较多。造血干细胞悬浮生长，聚集在一块。脐血间充质干细胞贴壁生长对造血干细胞的生长起支持作用。可以考虑共培养的方法。我养的是脐血间充质干细胞，造血干细胞在原代中很多，我一般换液的时候都去掉了，感觉挺可惜的。你是哪里的，要是西安的话我们可以合作，嘿嘿。

仁心-妙术

CD34+是造血干细胞表面抗原，可以通过密度梯度离心的方法提取单个核细胞，很经典的方法国内外文献用的都比较多。造血干细胞悬浮生长，聚集在一块。脐血间充质干细胞贴壁生长对造血干细胞的生长起支持作用。可以考虑共培养的方法。我养的是脐血间充质干细胞，造血干细胞在原代中很多，我一般换液的时候都去掉了，感觉挺可惜的。你是哪里的，要是西安的话我们可以合作，嘿嘿。