腺相关病毒/腺病毒感染MSC

bianhuimou

有没有战友用腺相关病毒或者腺病毒感染过MSC,能给个详细步骤吗？$ j+ U- `5 \* ?
感谢！

仁心-妙术

哈哈，同道。腺病毒载体转染UCB-MSCs。我还没做，这是文献里面的步骤：Third-passage cells were transduced with adenovirus containing either green fluorescent protein (GFP) (AdGFP) or both GFP and SOX9 (AdSOX9). The lanthofection procedure was described previously by Palmer et al. Briefly, virus was diluted in 8mL DMEM per 300 cm2 flask to about 10,000 viral particles=cell (which is approximately 100 MOI病毒感染), and LaCl3 (Sigma-Aldrich GmbH, Buchs, Switzerland) was added dropwise to a final concentration of 100 mM. After 30 min of incubation the solution was added to the flasks containing 20mL DMEM with 10% fetal bovine serum and incubated overnight. On the average 95% transduction efficiency was reached with this method.1 O! h# o, ^( _# Q
第三代细胞转染含绿色荧光蛋白（GFP）（AdGFP）或GFP和SOX9（AdSOX9）的腺病毒.  Palmer等前面描述的lanthofection程序。简言之，病毒在每300 cm2的培养瓶8mL DMEM培养液稀释，病毒颗粒约10000=细胞（大约是100MOI病毒感染复数），和氯化镧（Sigma - Aldrich公司的有限责任公司，布克斯瑞士）滴加至终浓度100毫摩。30分钟孵育后溶液添加到含20ml的含10％胎牛血清DMEM的培养瓶孵育过夜。用这种方法转转染效率平均达到95％。
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wolf1978

跟常规的腺病毒感染细胞没啥区别！一定滴度的病毒加入到培养体系中，作用2个小时，然后换液继续培养即可，感染效率高，可达到90%以上！

illidancui

求教为啥子我做出来的转染率相当的底，能到50%我就谢天谢地了。都是常规步骤，是怎么回事呢？

illidancui

求教为啥子我做出来的转染率相当的底，能到50%我就谢天谢地了。都是常规步骤，是怎么回事呢？

bianhuimou

回复 wolf1978 的帖子& }: ]+ i  j6 s& ?5 p! K, T) {9 F6 w6 p
1 _* g; ~) c0 g' a! I
您用的是AAV还是腺病毒？

gact

回复 wolf1978 的帖子8 h! b3 m' H- f! ~( E

1 G$ z9 G# |0 \% X% H4 E* `我用多聚胺混合病毒液，冰箱4℃放2h，培养10h，换新培养液，什么都没有。

cold儿

回复 仁心-妙术 的帖子. v- |. e  O7 R0 e3 P. I
% [( o. d' p9 g3 A4 u0 h+ k/ V
你好，可以跟你请教一下这篇文献的题目不，我最近要做腺病毒转染脐血间充质干细胞，摸转染复数!您做过这方面的研究吗?可以请教您是怎么做的吗？

cold儿

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( E. ?6 L; E) w
0 }" [; x* i# s% v3 r" c+ s- }5 n你好，我也在做这个，我师姐摸出的转染复数就在，100左右，请问你现在摸出来的转染复数是多少？