有关tumosphere培养的问题

rockysofar

请问做肿瘤细胞无血清球体培养的朋友
& e# E- ^4 j0 B8 Q, ~1在超低吸附六孔板中，每孔接种多少细胞？5000-20000个/孔？？？) }) V1 a$ M  T- `
2是不是都是隔天加入EGF 或者/和bFGF？？还是细胞接种之后就不再换液一直等到7天收集球体了？？？

饶冠华

rockysofar 发表于 2011-8-22 16:53
6 r3 w2 ?4 e: r: r& g5 `0 y5 n请问做肿瘤细胞无血清球体培养的朋友/ b4 I$ b- y5 R5 p0 I. w
1在超低吸附六孔板中，每孔接种多少细胞？5000-20000个/孔？？？" b5 S6 N5 g* F1 h
2是 ...

$ e1 h. e6 a$ s- n$ ~
不同肿瘤接种的细胞数目不太一样，一般从200~10000/ml的密度都有，如果细胞系的话，用的细胞数目就少点，如果是原代的肿瘤，用的细胞数目就多点。这个要靠自己的经验总结。4 m! e1 r/ o" h& v
关于生长因子，我是每三天加一次。一般sphere可能要2周左右吧，soft agar 也差不多。

rockysofar

我做的是细胞株。还有问题请教一下
. ^' @( u1 t: ~) q那如何区别细胞粘附成团 和 球体呢？
0 Y' `! B5 o1 M! B1 ~/ C! l5 k( w还有你每3天加入生长因子，是直接把生长因子加入到6孔板的每一孔中，并不换液么？还是直接换液？？

饶冠华

rockysofar 发表于 2011-8-22 19:03 4 h7 \: w) `- x8 W
我做的是细胞株。还有问题请教一下- O* J# x0 C) ?+ P. R! N$ C' H: x
那如何区别细胞粘附成团 和 球体呢？; A% E! s% h7 ~" D
还有你每3天加入生长因子，是直接 ...

5 o+ E2 V$ h! U. g每周换一次液  你可以看看培养液消耗情况  一般来说 几百个细胞消耗不了那么多培养基

amosummer

回复 饶冠华 的帖子
9 `( o& r5 n/ M
5 I) p( F9 Z: n0 {4 \- C: G请问下sphere 如何传代呢？用胰酶消化会不会对细胞活性有影响啊！

山羊

影响不大。0.05%胰酶，室温。我们就是这样的。

rockysofar

版主在请教一下，在开始几天培养的时候，细胞都聚集成团，你会去轻柔的吹打，使细胞分离么？？
2 j% E5 s7 p( b4 ~) H) d2 _

一枝独秀

要想真正区别细胞粘附成团 和 球体，我认为最有效的办法是在96孔超低吸附板进行sphere培养；其次，可以试一试soft agar