干细胞和软骨细胞同时提取培养

骨道边

        上个星期五又做了一次大鼠干细胞提取。同时提取股骨头关节面，半月板软骨还有终板软骨细胞。具体步骤就如同以前做的一样。可是以前总是污染，这次不同的是加了双抗，在pbs和培养液中都加，前几次污染是因为买的现成的液体培养液中没有加双抗所以污染了。还有在实验过程中一定要注意无菌，没一个步骤都要注意，昨晚每一步分离之后都要更换新的镊子和剪刀，所以之前要多准备点，就是一次性培养皿也要多准备点（我用的是自己消毒的玻璃皿），换镊子和剪刀的同时也要把皿换掉，就是说一个皿只能装一次液体，不可把液体倒掉洗洗再装新的pbs或者培养液，此时绝对不能节约，否则造成更大的浪费。/ q& h) {- ]1 Z# j: Z
    把长骨两端剪下，把股骨头先泡在新的pbs中备用，先把骨髓中的干细胞冲洗下来，处理好了之后再剪切软骨进行消化，最后在削椎体关节的终板软骨细胞。没有同时消化，怕是如果有一种细胞污染了会把其他细胞也污染了，一步一步的来。软骨细胞二型胶原酶消化过夜。
' g: [" U' D0 j5 G) Y    星期下午，提取软骨细胞，顺便看看干细胞。镜下就看见变白的红细胞，密密麻麻的，培养液也有点混浊，所以给其3/4量换液，一定要轻微再轻微，放回去。2 [0 q+ g/ c0 |1 Z+ c  }/ D
    星期天下午，在观察细胞，此时好像看见细胞有些变化，但是看不清楚，全量换液，但是也不敢晃荡的太厉害，轻拿轻放，换完液之后，终于看见那些细胞长成纤维状的东西了。但不是很清晰。
/ M" f8 y3 V' P* @/ U" ?    星期一，没看，让其生长。: Q: T. f9 ~4 Q% t& O1 T
    星期二早上，看见细胞长的很多，就是形态不是很均一，没有都是纤维状，还有些区域有叠加状，所以给其消化掉。胰酶一定要用质量好的，不然消化不下来一直吹打会对细胞造成很大的损害，上次我就吃了这亏。胰酶消化3min终止消化，按1:2传代。旧的培养瓶丢掉不用，都用新瓶。传好之后在镜下看细胞还挺多，一个挨一个的，密度还可以（具体多上没记数）。
  q4 V. A# j: h* L    星期三早上，看细胞已经贴壁，有的已经展开成尖尖的所形状。还有些细胞没贴，飘在培养液在中。1 D  k9 c' k0 L3 z( C. _
    因为害怕污染，所以没有拿出来拍照，继续培养中。希望这次能成功。
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