最近MSC老是被污染 - 间充质干细胞专区干细胞之家



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lanceyu1980

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楼主

发表于 2011-8-29 06:20 |只看该作者 |正序浏览 |打印

最近提取SD大鼠的MSC，原代细胞是72小时左右换的液（72hr内未见污染细菌），第一次换液（48hr）后一般出现细菌污染，第二次换液后剩下的一般细胞也污染了，操作过程是严格无菌的原则，同实验室的其他人在同一孵箱也没有这么高的污染，各位高手请问小弟在哪里除了问题，谢谢！

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14楼

发表于 2011-8-31 01:38 |只看该作者

谢谢楼上啦！

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zz091115

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13楼

发表于 2011-8-30 14:37 |只看该作者

更像是取材阶段污染因为外周血或是骨髓来源细胞数量都较大且悬浮状态会与细菌竞争性存货换液后大量未贴壁细胞被抛掉细菌就会爆发式生长其实加了双抗就是抑制细菌常见的双抗配置浓度是抑菌浓度而不是杀菌浓度如果是杀菌浓度的话会对细胞也造成较大的影响取材阶段如果是骨髓的话应该注意不要使骨的两端骨髓腔面就是红色的部分破损取出后在酒精中浸泡长骨30秒我这么做从未出现原代污染如果是换液污染的话你就要注意下操作

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RIVA2011

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12楼

发表于 2011-8-30 14:15 |只看该作者

我在平常养细胞时，不加双抗也没问题啊~请问双抗真的影响很大么？

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RIVA2011

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11楼

发表于 2011-8-30 14:14 |只看该作者

我在平常养细胞时，不加双抗也没问题啊~请问双抗真的影响很大么？

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若兰汀

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10楼

发表于 2011-8-30 10:30 |只看该作者

首先你得明确是不是细菌污染，细菌污染一般培养基浑浊（当然黑胶虫污染后期也会黑胶虫污染，不过在污染后3天比较明显，前期难以发现）。无论是哪种细菌污染，24小时后都会有明显浑浊。如果你确定分离后72小时内无污染，那污染就出现换液环节。包括培养基，培养器皿，操作台，隔离服和手套等都可能是污染源头。如果你添加了青链双抗还有污染，那极有可能是抗生素失效了，如果是这个原因的话不能排除分离后72小时内就存在污染的可能（抗生素不能有效发挥作用，细菌经过漫长潜伏期后迅速生长）。不管怎么样，一定要注意各个环节的无菌操作，包扩动物消毒，器械，培养基及缓冲液，培养器皿，操作台，以及操作人员的隔离衣物。分离细胞很辛苦，祝你早日成功