免疫荧光求助 背景太深

飞翔的十字架

在玻片上包了胶原 再接细胞
5 G# [3 R' s5 _' q用鬼丙环肽染actin，背景很深 而且细胞染上的亮度也不够
1 _+ A8 x  L7 o求教 会是胶原的原因吗
+ W- s1 x% G4 S* H2 ^8 u

oucflora

你说的是鬼笔环肽吧？鬼笔环肽可特异性的与F-actin结合，不知道你鬼笔环肽上是用什么荧光素标记的，我以前用的是TRITC-鬼笔环肽，细胞内的应力纤维显示的很清楚。如果你用的荧光素不太稳定的话，可能细胞内F-actin的亮度不是很好。不过，荧光染色后，拍照一定要快，如果长时间暴露在高压汞灯或者激光下，观察区的细胞的亮度也会明显降低。