蛋白合成水平变化问题

hndxws

我做的一个蛋白，发现它的水平是时间梯度下调的，为了搞清楚下调原因，我检测了mRNA水平，发现没变化，然后用蛋白降解抑制剂处理，发现也不是降解。最后用了蛋白合成抑制剂放线菌酮时间梯度处理发现蛋白水平没变化。所以觉得是蛋白水平合成被阻滞了。同时我做了不相关的蛋白，发现没什么变化。我的问题是能够特异（还算特异吧）导致蛋白水平合成减少的有哪些方面？另外，我做了该蛋白的mirRNA时间梯度水平，没发现有很大的变化，我很郁闷，还有什么途径能特异的减少蛋白合成的水平？

rain2402

如果不是降解问题的话，那有可能是被消耗，就要看蛋白的作用了。

zxcv12345

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几点想法：
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1.如果你的蛋白减少是由于蛋白水平合成被阻滞，而不是蛋白酶降解，那么它只会在某水平之上浮动，它只会在那么它减少到使用蛋白合成抑制剂放线菌酮后的稳定蛋白水平就应该不会继续减少
9 U( T$ R! l( F5 N0 S$ S4 h. |& s2蛋白酶抑制剂有很多种，有些对某种蛋白有效，有些就无效" N. y, q" l7 _% y/ k& ?
3放线菌酮如果抑制某蛋白酶合成，而这个蛋白酶是不稳定的话，他就会很快消失，就会不降解你的蛋白，因此你的蛋白稳定也可以解释

hndxws

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我用放线菌酮处理时是有时间梯度的，从；从两小时到24小时，蛋白水平都是一致的，可以排除你的想法三。我现在不是不确定我得到的结果，是要知道引起出现这个结果的原因有哪些可能性。

zxcv12345

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- o0 k( u% F% {1放线菌酮抑制蛋白合成，蛋白水平没有变化，这说明蛋白很稳定。
; c3 _7 ^% g& F( t1 h如果某种因素只是迟滞合成，只要你的蛋白继续合成（可能速度快慢而已，肯定比使用放线菌酮要高，因放线菌酮停止蛋白合成，至少要和放线菌酮持平，蛋白水平就会增加（因为你的蛋白很稳定），而不是减少，增加的量只是多少而已。所以蛋白水平合成被阻滞导致蛋白减少不大可能。8 b2 r) Z% r" p0 q2 A
2由于放线菌酮是广谱抑制蛋白合成，因此它也可抑制其他蛋白的合成，如果这个蛋白恰恰是降解你的蛋白的蛋白酶，而他本身不稳定，这是3想说的。
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用放线菌酮是不是可用更短的时间？ 如10分钟到2小时？没用过放线菌酮，不知道它的作用时间，也许建议很stupid
& c9 o  Q8 }) W/ y6 k$ s不知道你用了多少种蛋白酶抑制剂？

hndxws

回复 zxcv12345 的帖子0 f' `) L$ B3 Q( F/ {8 b) i
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暂时先不纠结放线菌酮的问题，退一步。你的观点认识可能是降解，但是我用了MG132时间梯度处理，目标蛋白如果是降解应该随时间增多才对，但是没有，另外，我也用溶酶体酶抑制剂处理了，也没有随时间变多。蛋白降解的方式常见的就这两种了，都没有使目标蛋白积累，所以我用了放线菌酮，而且放线菌酮两小时为单位处理，处理后每个样品钙蛋白水平都一致。
( P% R5 H4 Y6 A# r' X( o你说的处理时间可能是个问题，但我觉得加上我上面的实验，应该可以说明不是降解吧。
& e/ T0 w2 b, M其实我做到放线菌酮这一步后，下面的只能推测了，我觉得可能是蛋白合成方面被阻滞了，可能完全阻滞。我只想到了microRNA可能调控了翻译，但做了好像没有很大的变化，但microRNA的结果未必可靠，因为这是第一次做。所以我想问问，除了microRNA调控蛋白翻译之外，还有哪些因素会调控翻译水平？

hndxws

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" b: a$ y2 g' a9 {2 [

hndxws

如图

细胞海洋

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hndxws

2011-9-6 19:46 上传

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MG132没有导致蛋白富集