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优秀会员金话筒

楼主

发表于 2011-9-7 09:13 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

总共六个质粒，前五个提得很顺利，平均两天一个，这最后一个都提了好几次了，一直没提出来，而且问题越来越多，首先是提出来浓度600多，结果跑胶没带，然后是重新做转化，挑菌，摇了一天，菌液还是没混，而且还是很澄清，接着出现有浑浊的，用锥形瓶扩大培养，摇了一夜，结果锥形瓶里的菌液还是澄清的，这怎么提啊，愁死我了

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沙发

发表于 2011-9-7 10:11 |只看该作者

挑的菌落可能是假阳性的，一开始不长，后来抗生素失效后长，再扩大培养换的是新抗生素又不长；或者检查下抗生素是不是用错？5 m+ b' ?6 C/ N9 A

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优秀会员金话筒

藤椅

发表于 2011-9-7 10:20 |只看该作者

回复 seall 的帖子
- U6 ^" a7 q$ C4 T x; @
应该不是抗生素的问题，我们抗生素都是新配的，之前用没有问题，假阳性应该不至于，因为我是先600微升摇，浑浊了之后再扩大培养，到锥形瓶中摇，没浑

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板凳

发表于 2011-9-7 11:01 |只看该作者

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你是不是摇的gag/pol质粒，是个低拷贝质粒，很难克隆哦

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优秀会员金话筒

报纸

发表于 2011-9-7 14:37 |只看该作者

回复 jane2011 的帖子
) P1 A' S+ x+ h! v3 Q
不是，是oct4，也是低拷贝的质粒，也很难克隆，但是我用1.5ml管摇浑了之后再加到锥形瓶中摇，结果锥形瓶中一直是澄清的，很清亮，所以有点奇怪

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