有人养小鼠骨髓间充质干细胞并传过很多代的吗？

dragon513

回复 asejon 的帖子9 d$ Z4 u$ ^1 H7 h3 c

# o, H) R. u6 p( D- H4 u6 M6 D15分钟去除巨噬细胞、上皮细胞等是在一本教科书上看到肌肉源间充干细胞这样可以的，上面讲这些细胞会贴得很快，MSCs要慢一些。我也想着基本原理都一样就借用过来了，没有验证过，但应该不会是分离成败的关键问题。书好象就叫组织工程学吧，记得不太清楚了，我以前以前也做肌肉源MSC。

dragon513

回复 illidancui 的帖子# p2 h  A- @8 ^
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现在怎么样了？顺利吗？如果顺利能不能晒下方法呀？谢谢！

dragon513

回复 jj.jianjia 的帖子
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( n8 _$ j; ?, m, j) |8 l2 X好的，谢谢分享！

cuizhuzhu

我现在才刚开始养！总觉得细胞的状态不好!可能是血清的问题！杂细胞很多！

chengge21

回复 dragon513 的帖子5 q3 [: w/ E& W+ O( W

& K) u* \( l0 R" S) j我觉得用DMEM培养基冲出骨髓后在过滤之前是不是应该用1ml针头吹打一下，毕竟很多细胞是成团块存在的，直接过滤的话会损失一部分细胞，个人建议。我做的是SD大鼠的骨髓间充质干细胞，效果不好，传代效果也不好。   还有我觉得巨噬细胞15分钟贴壁并不明显，骨髓里面的血细胞倒是应该注意去除。

sysuhoo

就我们实验室养小鼠MSC的经验来看，小鼠的确实最难养，比人和大鼠的都难，但是也不是完全那么难。相对于人和大鼠来说，血清和培养基对小鼠MSC的增殖都不是最关键的，我们实验室比较过进口的和国产的血清，差异并不是十分大，而且现在一般都用国产血清来养，最多能养到20多代，而且在10代做分子表面标记都正常。其实我觉得对小鼠MSC而言，最关键的是细胞密度与细胞消化的控制，特别是在4代以前，一定要注意，要有耐心，不能贪进度和多。只要能过了4代，后面基本上就没有任何问题，一般像细胞系一样，一传3正常传代即可。

wujh1986

我们养的小鼠的BMSC一般都到五代了啊，小鼠要选择周龄小的，四周就可以了，可用密度梯度离心啊，αMEM+10%FBS。MSC不能用高糖培养基，易分化

细胞海洋

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live861215

回复 illidancui 的帖子1 _4 T" z; k) J& q

" m7 W; ~1 z( x8 D9 b3 I我现在做的是SD大鼠，刚开始做，我是用的是percoll液进行分离的，第一次没分离出来，第二次我配了1.090,1.077,1.067,1.055的梯度percoll分离，效果也不好，我每次用一只两周龄的SD雄性大鼠，能分享下你的经验吗？你采用的是什么分离方法。  U6 I# Z3 Q% I' }
先说下我的方法吧：' n1 X3 L( F% O/ b( h5 Y. D+ b% J
首先准备两个培养皿，分别加入无血清低糖DMEM12ml与6ml；然后大鼠脱臼处死，放入75%的酒精中5分钟，取出后，取大鼠前后股骨放入第一个培养皿中，并去除肌肉，转入第二个培养皿中，再用5ml的注射器吸取培养基冲洗骨髓，再收集第二个培养皿的细胞悬液于离心管中，1000 rpm离心15分钟，去上清，加入1ml无血清培养基重悬细胞，再在另一离心管中分别加入梯度percoll液（由离心管底部至上分别是高浓度到底浓度的percoll 2ml），最后将1ml的细胞悬液加在percoll上，3000rpm离心25min，出现一层乳白色的薄层，用1ml的移液器吸取这层细胞，将其加入到一新的细胞培养盘里，加入10ml含10%FBS的低糖DMEM中，于37°，5%的二氧化碳培养箱中培养。4 [! D) ~% ~  ~; j7 ~! e& N
希望指教！

violet_sc

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" O" O! o* X1 K2 a我在准备分离培养小鼠的BMSCs, 第一次做，希望能多学习些