MSC 冻存问题

tkpss18

之前有前辈跟我说过，细胞冻存血清的浓度不能太高，会对细胞往后的形态有影响。他建议血清冻存的浓度为20%或以下。我们现在冻存细胞的配方是10%DMSO+15%血清+65%DMEM。, ]" y! }& r6 D& }/ `' Y  A% e
冻存的话还是建议用程序降温盒，效果会比较好。. u5 Q7 c4 F8 @# x; v" V
复苏的话也想跟大家请教一下，我看过有人说不离心，直接加完培进去培养。第二天半换液去掉DMSO. 复苏的时候用离心还是不离心好？还有清洗DMSO用点滴法会不会好一点？谢谢。

tkpss18

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) g) B1 w7 O  k3 N* a' |4 S2 X1 F4 H我想请问一下大家在复苏的时候，如果是用离心的方法去DMSO的话，在离心完后有没有出现像Jelly like substance的东西，这个有人说是因为复苏的时候DNA会从死掉的细胞释放出来，然后会把附近的细胞团在一块。其实这个情况也不是每一次也会发生，但是一旦发生了就会有很多细胞流失。是不是唯一的解决方法就是加DNAse?

tkpss18

回复 deshenglll 的帖子& S" m" k  K5 Q8 v" h) U! Z
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我想复苏的时间主要是根据样本复苏的体积和容器来确定。最主要是不要把样本完全解冻。