为什么丝裂霉素C-20℃冻存下失效了？

dilal

前一段时间买了一瓶roche的丝裂霉素C 5mg，用PBS溶液稀释到浓度0.5mg/ml，然后分装到小管内，用黑塑料袋包裹后-20℃下冻存。上周取了一管，发现管子液面上和液面下都有黑色的晶体出现。4℃下解冻后发现液体有些偏紫红（据说是丝裂霉素失效的征象），液面上漂浮了一些黑色晶体，不溶。用10μg/ml终浓度（MEF培养液稀释），处理MEF细胞2个小时后，发现细胞仍有生长趋势。' ~8 r6 c$ s- ?& C5 S) ?$ y; M- I
不知道有没有人遇到过这种情况？丝裂霉素C究竟该如何分装和冻存？有报道说稀释后贮存在4℃，但是不能超过2周。冻存在-20℃下，又容易出现不溶性结晶，解冻后晶体溶解性差。不知道大家是如何取舍的？3 O* g% s! h# K
也有报道说用培养基溶解后，分装冻存在-20℃，用的时候解冻即可，据说保存时间比较长。不知道有没有人用过这种方法？希望大家给些建议。

runsong

我们分装保存的方法和你一样，也常出现细胞生长压不住的情况。帮顶，求解。

xiaomingxu

楼上的出现的现象，我们以前实验过程中也偶尔遇到过，解冻后发现液体有些偏紫红确实是丝裂霉素C 效价降低的表象，分装保存方法其实4度和-20度冻存均可，就看你用的时间，如果你用的量很大（1个月之内可用用完），4度保存是可以的。否则建议-20度冻存。我个人觉得，可能与你使用时间过长有关，建议：1，购买小包装的（2 mg）；2，4度使用不超过一个月；-20度冻存不超过半年。

dilal

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谢谢，下次购买小包装的看看

maozhuxiwo1

我们是用培养基溶解的，丝裂霉素非常不容易溶，一般我都是在30ML液体里使劲的吹打，然后再稀释，吹打，反复，直到看不到结晶，然后分装，-20保存。使用时，解冻后颜色没发生什么变化，可能颜色深吧  并没有发现有黑色结晶。

lhw7514093

我觉的还是现用现配，购买小包装的，最好计划好一次性争取把配制得MMC全用掉，这就要计划好成批次的处理EF细胞了, J$ z& m( O+ K" g5 x: W

zhusealin

-20保存可以，有不溶的没什么影响，用的时候稀释就没有了

ldy689689

我们是买小包装的，一次基本用完，然后剩一点点，保存到四度就ok

laputave

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回复 dilal 的帖子
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' `) q& ~$ V+ z1 s8 S我们实验室是稀释到0.2mg/ml,分装在EP管里-20冻存，也会出现黑色丝状结晶，使用时放在-4，终浓度10ug/ml，用MEF稀释。一只EP管很快就会用完，没有出现过MEF还会再长的很离谱的现象

我不是小龙虾

我也是用PBS配制的.分装到doff管里.我一般是在用的前一天放到4度.刚开始是有黑色丝状结晶...但是放一天左右.黑色丝状结晶就没有了.而且处理的饲养层还算好吧....没有增长现象