检测骨髓中的SDF-1的表达量变化最好用什么方法？

zoe

用大鼠建模后想观察下肢骨髓和肌肉中SDF-1表达量的变化，最好用什么方法？我能想到的方法是：1.切片做免疫组化；2.western blot, 肌肉可以直接用组织块提蛋白，但是骨髓呢，需要把细胞冲出来离心收集再提蛋白吗？可是SDF-1是分泌型的，冲洗离心后还有剩的吗？3.PCR，肌肉直接用组织块提RNA，骨髓则把细胞冲出来离心收集再提RNA。请问用哪种或者哪两种方法结合比较好？

wang3033

1.骨髓细胞免疫组化或免疫荧光比较省样品，可优先考虑, U' {. J9 c1 b& N1 }) Q! M1 w4 c
2.RT-PCR和western-blot也可以
, T5 a/ c7 E) C3 }3. 个人觉得骨髓细胞免疫组化或免疫荧光较好，可以原位观察哪种细胞表达SDF-1

zoe

回复 wang3033 的帖子0 X: v6 {' G0 m: \
. [$ H9 P# ^% o: `$ C+ F1 D( i! ~3 n
但是SDF-1是分泌型的，免疫组化和免疫荧光染片时要反复洗片，会不会造成抗原丢失？

wang3033

回复 zoe 的帖子
- s. O& l" M7 M: i- a. [1 w4 E/ y" J9 A4 {8 {, h. L
1,可能会损失一点
4 C# S. v. T( o* A$ d2.分泌型蛋白都要通过内质网和高尔基体合成和分泌，不是直接暴露在胞浆中，因此大部分蛋白都在内质网和高尔基体膜上。
  F  s1 R! u2 j

zoe

回复 wang3033 的帖子
: p* G) g4 c- O8 L8 d6 S9 M" ?! m0 c6 x, k& ?, R/ J6 e
那我用冲洗液的ELISA，再收集骨髓细胞做RT-PCR，再做个免疫组化，这样您觉得够充分了吗？因为这个指标对于我这个实验很关键。