关于反向PCR

军医

最近一直在做反向PCR，P出来的总是弥散的带，不知道是引物与环化后的DNA不匹配，还是条件要改进，哪位大侠给指点一下，附上电泳图。

军医

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. r: S$ x# L, ~6 R' m1 Y
. h/ c7 l+ I, g1 d% S我一直以来都是在4度里连的，一般连好几天，图中这样的情况是不是可能会P出来，需要改变条件呀，谢谢了

军医

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' r* B! W( B9 O, V/ o- c
8 g2 i, a% s7 C那我16度连接试试，谢谢！

军医

回复 yeya 的帖子& M* u3 g7 u% l  m

$ F) D- ^3 O& h) X, d$ a+ ~我把自连的产物转化了，但是要的菌液里提不出质粒，你遇到过没有呀？

军医

回复 yeya 的帖子6 }5 U" d; m/ ~  R* t- Y# d
; P% ?, r5 v, ^1 f
我是先酶切基因组再自连成环，拿连接产物做PCR，总是P不出来，我是要检测外源基因插入到基因组的什么地方。