神经球传代后分化

coffee.cat105

神经球传代，一传代就分化，用胰酶消化也分，机械吹打也分。我把分化贴壁了的细胞弃掉，把悬浮的神经球再传代，上午传代下午就贴壁上去了…………0 G* S% t8 x# b# ]; q4 _  ^

! Q3 d8 v! {3 y; u( `% u3 g有没有哪位也遇到过这种情况，怎么解决？

yinjiqingqq

你查一下你使用的培养液及培养瓶是否适用于培养NSC的

青云之上

你培养基添加血清了？培养基重配一下~~

coffee.cat105

invitrogen的neurobasel+B27+20ngEGF+20ngBFGF,有问题吗？

青云之上

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/ C, M) J& @  E5 g2 D% g3 q8 i% ?# y# q
我用的是Gibco的DMEM/F12，加B27，N2，EGF，bFGF，谷氨酰胺，要是贴壁的话，基础培养基没问题，那你的看下你EGF和bFGF的量是不是正确，要太多也会造成贴壁的。

coffee.cat105

我也有点怀疑是因子的问题，LS的EGF和bFGF用的多少，怎么稀释的，储存浓度多少，储存温度多少？谢谢哈

coffee.cat105

分享一下吧，问题解决了，是传代时间过长造成的，原来看的神经球7天传代，所以我也就7天传代了，这个时候的神经球也比较大了，很难吹散或者消化，我把分化了的细胞弃去，把传代后培养了5天的悬浮部分机械吹打传代，到今天3天了，没有贴壁，没有分化，可见明显增殖，说明这个传代时间真的是十分重要啊

yinjiqingqq

回复 coffee.cat105 的帖子2 z; p8 }5 t7 b/ b4 M/ _6 k

5 W" d4 d' w8 t9 R) ?8 S神经干细胞传代是如何操作的啊？请赐教

coffee.cat105

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7 ~/ K) `3 k: ?* A我是细胞100G离心5分钟，上清倒掉，留1-2ML的样子，移液枪吹打，开始吹的时候是液体澄清但是看得到颗粒的，就有点像凝集实验的凝集相的那个样子，吹个几十下液体就不澄清了，也看不到明显颗粒，就可以了，镜下看就基本分散了，最多有十几个细胞聚的小球。

coffee.cat105

回复 yinjiqingqq 的帖子5 ]# M: U2 f# y" c; i! R

) s2 v5 Y* o1 @: ~; F/ l1 q+ N$ V我是细胞100G离心5分钟，上清倒掉，留1-2ML的样子，移液枪吹打，开始吹的时候是液体澄清但是看得到颗粒的，就有点像凝集实验的凝集相的那个样子，吹个几十下液体就不澄清了，也看不到明显颗粒，就可以了，镜下看就基本分散了，最多有十几个细胞聚的小球。