神经球传代后分化

coffee.cat105

神经球传代，一传代就分化，用胰酶消化也分，机械吹打也分。我把分化贴壁了的细胞弃掉，把悬浮的神经球再传代，上午传代下午就贴壁上去了…………, K6 R1 D7 B0 d. |! a
4 I" _/ R/ L2 h! Q
有没有哪位也遇到过这种情况，怎么解决？

yinjiqingqq

你查一下你使用的培养液及培养瓶是否适用于培养NSC的

青云之上

你培养基添加血清了？培养基重配一下~~

coffee.cat105

invitrogen的neurobasel+B27+20ngEGF+20ngBFGF,有问题吗？

青云之上

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7 L" P1 W! w  c  q4 I( H
9 _5 `8 X; g: i! Y1 q我用的是Gibco的DMEM/F12，加B27，N2，EGF，bFGF，谷氨酰胺，要是贴壁的话，基础培养基没问题，那你的看下你EGF和bFGF的量是不是正确，要太多也会造成贴壁的。

coffee.cat105

我也有点怀疑是因子的问题，LS的EGF和bFGF用的多少，怎么稀释的，储存浓度多少，储存温度多少？谢谢哈

coffee.cat105

分享一下吧，问题解决了，是传代时间过长造成的，原来看的神经球7天传代，所以我也就7天传代了，这个时候的神经球也比较大了，很难吹散或者消化，我把分化了的细胞弃去，把传代后培养了5天的悬浮部分机械吹打传代，到今天3天了，没有贴壁，没有分化，可见明显增殖，说明这个传代时间真的是十分重要啊

yinjiqingqq

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5 {. j/ V: I/ F. B3 w
  C& b: t2 B( h6 V1 B神经干细胞传代是如何操作的啊？请赐教

coffee.cat105

回复 yinjiqingqq 的帖子+ G. Z  ]. E0 f- H

4 o+ Z; P1 [) i/ T# G5 X5 A, q我是细胞100G离心5分钟，上清倒掉，留1-2ML的样子，移液枪吹打，开始吹的时候是液体澄清但是看得到颗粒的，就有点像凝集实验的凝集相的那个样子，吹个几十下液体就不澄清了，也看不到明显颗粒，就可以了，镜下看就基本分散了，最多有十几个细胞聚的小球。

coffee.cat105

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: w' o% N% @* v* P, q3 i7 {+ X我是细胞100G离心5分钟，上清倒掉，留1-2ML的样子，移液枪吹打，开始吹的时候是液体澄清但是看得到颗粒的，就有点像凝集实验的凝集相的那个样子，吹个几十下液体就不澄清了，也看不到明显颗粒，就可以了，镜下看就基本分散了，最多有十几个细胞聚的小球。