求指点，骨髓间充质的污染，不晓得是神马。。。求高手鉴定

lucy157

    今天的真滴是灰常的郁闷。。。。已经连续第二次养骨髓没有养起来了。本人用的方法是骨髓离心之后裂红直接养，以前每次都养的好好的，这连续的两次，每次5天换液后细胞基本就都挂了。而且换液之后再过一天培养液就呈现白色奶白色的浑浊液体。染菌了么。。。但是诡异的是我养的所有细胞（同一时间养的，而且用的培养基全部都是一瓶，而且有的传代都是在同一个操作时间操作的，有UMSC,ADSC都好好的。。。）求高人指导。。。我拍了张不是很清楚的图片。。。我真的要哭死了。。。55555，又要被BOSS骂屎鸟、、、、郁闷了一个多礼拜。。。5555553 s3 D2 p0 O' g; @

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ele722

刚开始养，这些经验很有用!

yiyi8909

看图像是污染，分离时可以采用全骨髓培养法

流浪的猫117

话说楼主显微镜的相位没有调好，我记得应该放在PhL-1还是什么来着，不然就会拍出这种模糊暗淡的照片。

wangzhiqi86

可以用淋巴分离液试试，纯度应该会好很多

李1二

我之前也在论坛上问过这个问题  后来各个环节思考了一下  发现时双抗过期  其中配好的青霉素还有混浊和沉淀  重新配了双抗就好了……  还有一次是因为200目筛网边上有一点锈迹我的培养基冲到了  不一定适用于你的情况  但是你可以把与整个实验过程相关的环节  凡是接触过的器械试剂都检查一次  

zarecol

培养液变浑浊，一般情况下是然菌了，而且根据你提供的照片推测你用的培养液应该是加过酚红的，现在变成了淡粉色，证明培养液PH变小了，然菌的可能性很大，既然是换液后出现的，我个人觉得你应该检查的培养液和操作环境及步骤。我一般用密度梯度离心法提取，细胞生长的很好，你也可以试试，这样提取杂细胞较少，而且长势也不错。希望你成功，有什么问题可以跟大家交流。

luther

一定是污染了，查污染源。注意无菌操作，培养基鉴菌

henryjia

iceyang 发表于 2011-10-17 11:22 8 W% c% U* w' b* A
什么动物的骨髓，什么样的取法？说的清楚一点大家更好帮你判断。还有首次5天换液时间太长了，一般2天就差不 ...

! T* l0 l, c: i3 [* v* O的确5天换液太久了，没有细胞贴壁可以考虑分离有问题。从照片看肯定是细菌感染，霉菌不至如此浑浊，且有漂浮物。
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应该好好回顾一下你的操作方法。

bin

我养BMSC时就是全血差速贴壁，取材2-3天全量换液，以后半量换液，细胞涨势很好。你这个根本就没有看到细胞贴壁，3-4天的时候有没有细胞贴壁的？看这个样子好像是污染了，把所有的东西全部消毒一次，培养液和血清换新的，取材过程中也要消毒彻底，再试一试。