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标题:
Percoll 分离小鼠淋巴细胞 最上层的细胞是什么？
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作者:
zerollx
时间:
2011-10-18 11:37
标题:
Percoll 分离小鼠淋巴细胞 最上层的细胞是什么？
本帖最后由 zerollx 于 2011-10-18 11:39 编辑
5 r6 ~- B0 B& `- d
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最近做了一次淋巴细胞的分离，分离方法如下：
2 E2 m9 R( f2 l* S h9 T
1．取4ml的70% Percoll 加在15ml 离心管的底层
$ W8 X: P7 z% w" q' O
2.再取4ml40%Percoll，铺层，形成第二界面
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3.将用红细胞裂解液裂解后的细胞用1ml的DPBS重悬细胞，缓慢将其加到分离液的表面，注意勿破换界面。离心后形成分层如下：
7 C b' c3 |, f' f6 S8 P
1 U4 E; a5 p7 K9 o: I3 Z, V
* |3 Q. ^: h8 a2 O
标问号的那一层白色云雾状是什么细胞？因为分离之前已用红细胞裂解液裂解，洗涤了3遍，是血浆的可能性应该不大，而且血浆的颜色也不应该是白色的吧，所以很好奇，望有大家指点……
作者:
wang3033
时间:
2011-10-18 13:14
是么细胞都不是，是Percoll和DPBS的分界面形成的折光带
作者:
meister
时间:
2011-10-18 13:16
支持，应该没有细胞了
作者:
zerollx
时间:
2011-10-18 14:25
本帖最后由 zerollx 于 2011-10-18 14:27 编辑
1 K9 g3 e2 I$ P3 h. D+ J9 s) L! n
8 @ j- N0 O/ Q7 s
回复
wang3033
的帖子
4 H) @7 @, x7 f5 c9 x1 p8 z- @
0 X1 r" D E# j* u4 D' n8 A2 P2 d" e
图片上也许看不清楚，但是确实是一层物质而非折光带，我同时也做过另一个方案，是将细胞用40%的Percoll重悬，再加到70%Percoll中，也得到类似的结果，但是不同的是形成的不是一条很细的带，而是很宽的区域，给你看图
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[attach]34449[/attach]
作者:
meister
时间:
2011-10-19 09:01
如果你觉得是细胞， 可以将这部分单独去除，稀释，离心，镜下观察， 就知道有没有细胞了， 如果有，拍个照片看看
作者:
wang3033
时间:
2011-10-19 09:28
那个部位一般不会有细胞的，最多是脂蛋白等的血清成分或许是细胞碎片或是亚细胞结构，我只能推测，你最好把那部分按血涂片处理一下，显微镜下观察，看有无细胞存在？
作者:
zerollx
时间:
2011-10-19 12:57
本帖最后由 zerollx 于 2011-10-19 13:18 编辑
$ a1 n! ^0 Z. @ F
9 @3 h6 }: G$ V P# U0 N1 A D! S
嗯，悔不该当初直接将其扔掉而未观察，下次再观察……
作者:
weisong1015
时间:
2012-1-11 11:27
你好，我也是做的小鼠的单个核细胞，你用Ficoll法取得单个核细胞吗？但我从网上看到，获取单个核细胞是用免疫磁珠法或是流式细胞术获取单个核细胞呀
作者:
weisong1015
时间:
2012-1-11 11:36
我还有一个疑问？你为什么用PBS重悬呀》PBS的颜色与分离液的颜色近似，中间云雾装的单个核细胞层很难获取，会丢失细胞，问什么不用DMEM呢。
作者:
ACQDONGYING
时间:
2012-9-27 10:42
版主：
) A7 X# E2 o2 z3 ]6 _
我近期准备做小鼠肠道LP淋巴细胞的分离，所以查阅了了一部分资料，很多人提到了PERCOLL梯度不分层的现象，你是否也遇到过相同的问题或你觉得可能的原因是什么？方便的话是否可以把你处理PERCOLL的配方发我份，我的邮箱
acqdongying@163.com
,谢谢啊
; q) ^( o9 V/ K' O. m% u4 o
作者:
细胞海洋
时间:
2012-9-29 11:15
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ACQDONGYING
的帖子
* @/ x% U# ^5 }! y$ T
. }" V, T* b- @- x# \0 i
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作者:
香草小钱
时间:
2012-11-24 22:38
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ACQDONGYING
的帖子
( \; Q2 g$ f3 s8 }) d3 ~4 S
' ~. z2 n R+ N
你好，我也出现了percoll梯度不分层的现象，请问这个问题解决了吗？可以的话能交流下吗？非常着急
作者:
细胞海洋
时间:
2012-11-26 10:35
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香草小钱
的帖子
9 P" ?$ q6 h0 B
+ L0 o. j; R, ]% d! H0 k% ~
建议你发新帖提问
作者:
bloodroses
时间:
2012-11-27 09:06
不是细胞。经过裂解液处理后，又洗涤了三遍，应该能去除绝大部分的血小板，所以可以排除血小板富集的可能。
1 }- C4 @3 Y& m$ \5 Q* t8 m; b
应该是DPBS与percoll层发生相互渗透造成的视觉影响。
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