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如来的观音

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楼主

发表于 2011-10-27 15:15 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

在一份ABI7000型定量PCR仪中文操作手册中看到这样一段，那么我们假如利用自动分析结果得出最小CT值为12左右（不符合>18的要求），意味着要修改终点，就用12-4=8再次分析。据我所知基线起点到终点长度应该≥6，那么修改后只有5，这种情况怎么取舍？谢谢高手

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沙发

发表于 2011-10-27 17:45 |只看该作者

楼主样品浓度有问题，CT值一般介于15—30之间，小于18的话，对样品进行稀释。改所谓的基线终点是错的。

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如来的观音

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藤椅

发表于 2011-10-27 18:52 |只看该作者

回复 feihua011 的帖子
6 F: E! W R1 f! D% `
那要是我做出来自动分析CT值为13呢，样本浓度该成5倍或10倍稀释？3 b9 y8 m: l! x7 j
再问下，RT-pcr的数据分析（2-deltadeltaCT法）是建立在假设目的基因和内参基因的扩增效率大概一致的前提下，并且在95-110%之间合适，那怎样才能确保扩增效率呢？难道每次上机前都要做标准曲线计算扩增效率吗，或者所有试验只做一次标准曲线计算扩增效率用在所有的后续试验中？. B3 Q" g9 F! R. ~+ q
谢谢

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