如何培养乳腺癌干细胞

dmmwhb

首次用乳腺癌细胞系MCF-7种到悬浮培养基后细胞聚集到一块，3-4天传代时要不要用细胞滤网将细胞过滤为单细胞？

gandanxiaoyang

出现细胞聚集多数原因是细胞密度过大，或者是培养板过早晃动。
1 G# a" t5 }9 E! o细胞一旦接种，7到10天内不要去看。$ h( i8 M5 c# e' y6 `3 {  T
否则，不规则的晃动会使细胞聚集。
' B& H! k* v; E, x3 `& U此外，培养基中的杂质也会造成细胞聚集！

gandanxiaoyang

传代时需要用机械的方法或是胰蛋白酶消化后，过200目尼龙网成单细胞悬液后接种。

繁星932

我的观点是SFM培养以后，3至4天形成细胞球才是正常的状态，传代时需要通过酶的消化，使其成单个细胞后，再培养。

shen_coco

肿瘤球传代相对较烦，胰酶消化后又不能加血清中和，我一般都用PBS洗两次，感觉细胞损失量挺大的

dmmwhb

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* |- n; ?7 i, o6 U
" y. @' q, O. ], n如果2、3天后细胞聚集在一块怎么办啊？需要吹打开吗？

gandanxiaoyang

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# G; k0 L4 t& N5 j8 e3 H( l6 l$ Y! @) z) V
只要开始时晃得均匀些，放进孵箱后不动他，基本上不可能聚集到一起的。+ d+ Y) |; g4 p- d  T& S
不要经常看细胞，越看越容易聚集！

dmmwhb

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1 x% @4 _1 |/ i, X' c你用的细胞密度是多少啊？