外源质粒是怎么整合到细胞基因组中去的？

echowdk

2 G3 Y8 D: x0 n. K0 x: B/ g3 ~
, p; ^$ T9 M7 f, Z* d2 X
一直有个很弱的问题不明白。
# T$ \$ N$ M! o) [# G. V我们在做稳定转染的时候，有的时候用没有线性化的质粒，这个环状质粒具体是怎么整合到基因组中去的呢？

naturalkillerce

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2 A2 I  O: t9 _# o0 _8 A5 w
! @( x# w5 i7 H粗略地讲，是通过同源重组，即质粒上的同源序列与基因组上的同源序列发生重组交换，质粒就整合上去的。

牛还可乐

wangyashuai

质粒与基因组同源部分相重合，就有一定的几率发生同源重组，与质粒是环状还是线性没关系。

guxi124

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+ @6 Q  F7 O- B( {0 H# u! a) z; t  F% X
我以前做过毕赤酵母的转化，转化前质粒要线性化，说明书上说线性化后更有利于同源重组的发生。

yyshpy

重组互换，比较随机的

wangyashuai

从其他地方见到这些问题：“整合型质粒的线性化是提高了转化效率还是重组率？线性质粒进入细胞后，是重新环化进行同源重组，还是以线性结构进行同源重组？有论文说毕氏酵母染色体整合中的单交换是环状质粒的单交换，双交换是线性的交换”。还有就是其中说的单交换和双交换是什么意思？望大家解惑。

wangyashuai

我想单交换与双交换是针对同源重组的次数说的，环形质粒只用进行一次同源重组即可整合到宿主基因中，而线性DNA必须经过两次同源重组才能整合到宿主基因中。在论文中说单交换是插入，双交换是替换，但我有些想不通，线性DNA进行一个位点的同源重组会使基因组断裂，又如何插入到基因组中的？

echowdk

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7 V! F$ G1 S- Z% {8 M- ?$ O6 k9 W$ ^3 J
. H. r9 w0 d: i1 ]5 Q: o很遗传的问题啊，不知道遗传学那本教材上有没有。

bobo198666

我们做基因打靶的时候，转染前一定要质粒大切线性化，电转会比脂质体效率高很多