刚买回来的条件敲出鼠大家都做鉴定吗？

bobo198666

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你们有rosa- loxp-stop-loxp-EGFP report小鼠吗

echowdk

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1 q0 D: a# ~4 R% L4 ]6 ~! N那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？

echowdk

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那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？

echowdk

回复 bobo198666 的帖子1 I! V" G" Z$ A/ g
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那那种组织特意性表达Cre酶的小鼠，是不是最好还要和Rosa鼠杂交鉴定一下？

bobo198666

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如果是从公司买的，pcr鉴定测序就够了，基因和纯合子都能鉴定出来

echowdk

回复 爱鬼鬼 的帖子( y: g( `8 }& B  U

5 u6 S; W, I0 I& m8 {哦，我买的是cre小鼠，不带loxp的，所以你说的如果不成立。谢谢~~

echowdk

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是人家给做好的，拿到手之后还用再做southern吗，简单的验证下不行吗？另外，拿到纯合子再交配是必须的吗，是不是得根据实验目的决定？

bobo198666

目前对于knockout小鼠做鉴定只有pcr和southern两种，pcr不够准确，需测序才知道。southern则不太好做。如果是条件性敲除小鼠，一般是cre与loxp的，需杂交拿到纯合子再交配发挥功能

爱鬼鬼

" Y; T; b! I' N. U1 K+ V6 C* Y
! b% J7 D. l. J
条件敲除一般运用loxp位点与cre酶作用9 G2 r2 Z: Z. t: [# t7 G
jackson买过来的小鼠，应该是纯合子，你可以交配产生下一代，看下一代是不是杂合子；直接拿买来的小鼠也可以取外耳廓组织（大于10天的小鼠有痛觉，不宜剪取尾巴），jackson网页中有pcr的引物和条件。当然这个是用作基因型鉴定。! f9 D3 G) M* T0 z
如果实在不放心可以看loxp位点插在基因的什么部位，pcr出来，连个载体，送测序，看插入的loxp是否完整，是否在所要的的位置。

echowdk

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' y1 Y" W0 d' t+ J4 v
# S( I- t# y  L! z$ M是从jackson lab 买的，比15万要贵。要是组织特异性表达的敲除小鼠，是不是还要让它跟rosa鼠交配一下，更精确一点？