求助，我这还是间充质干细胞吗？

hnsdlgl

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3 Y  G4 x3 }* b情况是：这是用脐带做的组织块培养，第一天铺完组织块后（当时组织块上附着的有培养液），因为一些原因没及时加液，6天后才加的培养液10ML，到现在是15天时间过去，细胞是长出来了，但是形态不是很好，有点像帖子上说的“核溃散”，不知道是个啥情况。我的问题：: }# m# j: ]! q2 v4 t  n! i
1.如果是间充质的话，但是传代后细胞为什么不贴壁。
' R8 @" y2 I  S% n! _2.如果不是MSC，那是什么细胞？ * x& H  P7 A- n( I! Y- A
3.是不是老化了？一些细胞形态变化很大！" % m3 O& c0 e5 @3 H2 T$ v6 U" p

- s: P+ p- Y& t+ {* L根据你的实验过程描述，我有一个问题：你第6天加培养液之前，培养瓶是否已有部分干了？加培养液时，用的什么血清，浓度是多少？
+ W2 N1 d$ w3 C; F1 M2 b7 f! t, s  ~9 }0 I5 n9 U2 Z% @5 x
你的细胞形态是MSC，但是如果消化后传代，那就大部分不是MSC了，而是MSC碎片，因此也就回答了你前面两个问题。
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其实，你对问题的分析也基本正确，这种情况可以说是细胞出现了老化，更是受伤的表现。
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, D+ }4 h' A9 E9 p细胞培养过程中，培养基至少给细胞生长提供了三个方面的作用：) v3 d  p& p, @% ~( R
1. 合适的pH、渗透压，以及某些营养条件
. b( s& d" Y7 l2. 一个比较稳定的代谢交换体系：活的细胞都要代谢，代谢产生的垃圾直接排入培养液，因此，我们隔一段时间就要换液，主要是保持培养液的新鲜，不然自身产生的垃圾直接伤害自己；或通过改变pH、渗透压等间接伤害自己。: Q5 m5 v* W0 ]$ ]
3. 屏蔽高浓度的氧损伤：氧在溶液中的溶解度比大气中的低得多，从而达到一定的较少氧损伤的作用。" a0 a% r' x7 w& D& {  i
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同时，细胞培养过程中，血清主要的作用时两个：1 \9 ]0 I  @5 C' x
1. 提供充足的营养
2 v# S, f, K- Z2. 提供细胞生长所需的生长因子* R6 p9 G8 j) s9 {4 |
以上两点，也是为何我推荐使用进口血清的原因，四季青的血清看上去就很稀薄、清亮，其营养没有那么充足，生长因子几乎缺乏。只有运气好的时候，偶尔可能碰到一两批可能可以用来培养MSC。
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你换液时间太长，细胞可以因为生存条件恶化而受伤，而可能因为营养缺乏而老化，所以出现你所述结果。9 y# _4 a- W, I  R$ J$ U+ L

; o7 t7 y2 N3 ~【个人观点，仅供参考】

hnsdlgl

zhang0194 发表于 2011-11-17 11:19 / s2 ^# d0 A. J, J+ Q$ C
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% h- {+ q% t9 ~! P# C6天加液的时候，瓶子里已经有点干燥了！

2 w5 `/ ~3 p' {从细胞形态，我估计也是这样。9 B2 b) X+ ]8 }; x
瓶子里培养基体积发生明显变化时，渗透压、pH都会发生很大改变，这种改变对细胞来说是很要命的。所以就出现你看到的奄奄一息的样子。

hnsdlgl

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zhang0194 发表于 2011-11-17 11:17 7 s% T' d( A* D8 o9 f" P
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' E$ @1 c8 a) [- c9 [: C  U( Q& \/ w3 u5 r/ b) _9 w$ N5 {
用的是无血清培养基！消化的时间很短暂，主要靠吹打，是不是形态变化以后比较“不耐受 ...

  ~5 K! _2 N" u8 _
: G" g! L3 V) ]* \& h; f1 U
培养基用得很好啊，呵呵。; I; f: j7 a5 y! A1 _, N) _
从对细胞的损伤来说，我们通常说三种损伤：3 x( ~7 E- K. B5 i3 U2 l& `
1. pH、渗透压改变导致的损伤，此损伤如果时间很短，是可以恢复的。
# x5 A) {2 l' m; m. b3 g; \5 T2. 胰酶导致的表面粘附因子的丢失，此类损伤导致传代后细胞贴壁困难，因此胰酶消化后要离心，消除胰酶的持续作用，原则上，只要不太过，细胞也是可以恢复的。
) x( q- O- Z( S: o* Q1 G3. 机械损伤，如传代时吹打引起的损伤，这类损伤稍不小心，就直接把细胞打成碎片了，那结果就不用我说了。
  N! C, F" O) C, d我估计，你的细胞本来就很受伤，加上你这么一吹打，大部分变成碎片了。
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因此，总体说来，胰酶消化比过多的吹打对细胞的损伤还要相对温和。 不过，我还是建议不用吹打，而用拍瓶的方式传代。
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- d; O+ V: U5 S5 }) c4 k( u有关拍瓶传代的详细过程，我已经在别的帖子中详细说过了。% I7 T' h) c3 @" u$ ^5 o! J4 Y8 X
具体过程，请见“我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？”（第8楼我的回复）
, d" U6 x4 V0 w- zhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... ge-1.html#pid517995& o8 U3 ^0 N# b* S2 O4 f/ W
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