5'RACE的方法主要有哪几种？

heiguzi1988

我看到的是TAKARA的去帽然后加接头方法。; {5 `* V, @$ W8 l- J
请问还有哪些比较经典的方法？比如SMART的用的是什么方法？谢谢。

langziforever

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据我所知，TAKARA Smart方法就算是比较经典也比较广泛使用的方法了，因为它用的反转录具有末端转移酶的功能，所以，反转录到头后会加三个GGG，然后和反转录时加入的带有3C的oligo配对，继续反转，这样就在第一条连后加入了一段oligo，后面就剩下PCR了，我感觉效果还是很好的，而且价格比较便宜！其实不同方法间的区别就在于所用反转录酶的不同，以及反转录方法的不同，具体有多少种就不知道了，反正你要用商业试剂盒，你可以去各个公司查一下，好像promega和invitrogen都有相关的试剂盒！

heiguzi1988

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. C9 Y; j: S2 Z& u& l我看的一种方法应该叫做去帽加连接接头的方法吧。不是从POLYA 开始反转出第一条CDNA，而是从5‘端反转出第一条CDNA。

langziforever

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也有先把RNA的帽子去掉，然后加一个RNA adaptor，但是，反转肯定是要从polyA或3‘段特异性引物开始的，合成第一条cDNA，因为这个是所用酶催化DNA合成的方向决定的！1 l6 B3 D, e5 G( @