请教MII期卵子染色体扩展

xiaomingxu

楼主的问题真的是一个很棘手的问题，我们也尝试过做MII期卵母细胞核型，但效果也是不理想。
: i+ d9 J5 o( E/ I0 E4 L6 P但可以就一些细节问题进行切磋：我们尝试的方法是，先AT去透明带，PBS清洗，然后，醋酸钠+BSA低渗（可以尝试KCL低渗），TW-20/HCL固定（楼主用甲醇：乙酸=3:1固定确实很剧烈，会发生卵母细胞找不到的情况，所以要尽量控制加的固定剂的量），后面常规操作，遇到的情况与你基本相同，有时可以见到完整的染色体，但有时染色体散的很开，也遇到染色体凝集在一起的情况。改进中......

xiaomingxu

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; f0 |1 X6 ~. J( t3 ~) B
/ k( R: D# Z" a1 W- S不知道你所说的成功率是指什么，如果只是看到核，那基本没什么问题的，如果要得到很好的分散染色体，那就比较低，大部分是分散度不好。

xiaomingxu

回复 hcluo 的帖子+ U& |- y8 Q" o
# U! c9 a' o# _4 a0 a! W
低渗液：1% （W/V）醋酸钠+0.6%BSA;时间5-10 min；
; p0 N" A6 S' F固定液：10 ml 五蒸水中添加10ul的HCL 和10 ul的TW-20;时间要自己把握哦；
( E& b' ]% U/ n0 i# FAT是酸性Tyrode，去透明带用的，PH2.5，1min左右即可。
$ T- b( E6 `  A% @你们可以尝试一下，然后共同改进哦。

xiaomingxu

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; b4 N. D5 A0 Y( h; X* ?- N确实遇到这种情况，你可以用玻璃笔在玻片下面画一个很小的圈，然后把卵母细胞转移到其中，体视显微镜下操作。