人胚胎干细胞传代的操作

bigsnow55

不知道哪些战友在培养hES细胞？
7 e5 B7 M6 H/ Y/ A7 z' Q我最近才开始养，用机械切割法进行传代，感觉很难操作，切割时，整个MEF连成一张网，被一起牵扯进来。而且，切割后的细胞卷成一团，大小也相差很远。传一皿60mm的细胞，花了我近一个小时，估计对细胞也影响很大。9 W6 O% K6 O/ O4 k. n& r
不知道各位都是如何传代的，能否介绍一下经验？- V" r/ K  K. i& W! c. ?! X
谢谢！

zhusealin

我们是消化下来放离心管里，用移液管吹几次，肉眼看大小合适就行

bigsnow55

回复 zhusealin 的帖子% N, n  _: h# W; \. l7 P  r0 S

# t+ Z. }: W7 ?" A& u* }谢谢zhusealin！你是用胶原酶消化吗？能否告知具体步骤？非常感谢！

zhusealin

1mg/ml 胶原酶37度消化20-30min

dongxin

建议在镜下先将整个hES克隆和MEF分开，再将hES克隆分成小团块，之后用移液器将小细胞团块转移到新的皿中，祝好运！

123150075

我也是用1mg/ml的四型胶原酶37°消化30分钟左右，收集到离心管里，稍微轻吹5下左右，当然这个力度和最终团块大小你要自己把握。。。祝好运。。

sarah19860420

回复 123150075 的帖子" `' B- A) E8 D& A8 O* X, J. ]

; h1 I  A  K/ q% \* U. U5 C想问下，那个团块应该大概是多大呢，大概多少个细胞呢。我发现我机械加没消化法结合进行细胞传代，发现，肉眼可以的团块在第二天都不贴壁，反而是那些看不见的的团块贴壁效率较高，能帮忙解释下为什么嘛？谢谢

leozarah

机械法对干细胞的损伤太大了，建议用酶消化法。

lingminliang

用胶原酶消化一般十到十五分钟就好了，消化时间过长多细胞很不好。消化道在显微镜下观察发现克隆团变圆且较亮，边界微翘，就可以轻轻用枪头吹下来了，吹得次数要尽量少