关于人全长cDNA的获得

ndwzf

回复 spchsq 的帖子4 U% c3 r$ m/ H9 b0 B" X; ^
! B" _! ^$ n3 u, S
怎么要呢？

Yedan

回复 ndwzf 的帖子
# q5 x/ g4 Z& q$ }% @2 {7 c7 Z' E
, v: x% E3 {& O. j* t/ u# @9kb....肯定得用lenti的载体了，FUGW吧
2 i/ ^% k2 U6 N+ L# A至于酶，你问下Roche的人，他们有P长片段的，我用过还行，名字我记不清楚了...
% _* Y3 [7 M# b- [# {  P" Y如果实验室有Taq和Pfu，可以1:1混合用，这样也可以做的，P长片段我经常这么干，但是别跟老板这样，会挨骂的...

不倒翁

KOD的酶很好用 实在不行分段克隆吧

spchsq

hndxws 发表于 2011-12-6 18:00 - J0 {+ H. D3 @/ ?2 E3 y% h
我给你提供一个地方。厦门大学的韩家淮教授免费为大家提供人类的基因，只要他有的都会提供的，我已经要过好 ...

- T; {! J. }" n, ?向这位韩教授致敬，希望有更多这样的科学家

langziforever

回复 ndwzf 的帖子/ j2 y7 U& s" Y

; n4 W0 H* {' }3 i" _3 m/ Y% C好像很多公司都有那种高保真针对长片段的酶！

langziforever

回复 wangyashuai 的帖子, I/ R9 W' D0 o5 p' _* U9 @
7 z- n  I* I: |! H: v1 q9 x
因为我要做表达，肯定是需要一个基因的全长cDNA在同一个载体上！

ndwzf

回复 Yedan 的帖子% y  ~0 ]+ {; U

* W! H. z$ }  y6 `我想P的基因有9kb（不分段克隆），你有神魔好的酶和载体，能推荐一下魔？

Yedan

7.5kb是有点长的了，反转录肯定没问题，你找个高表达的细胞或者组织抽RNA吧，然后就硬着头皮P吧。GL

hndxws

我给你提供一个地方。厦门大学的韩家淮教授免费为大家提供人类的基因，只要他有的都会提供的，我已经要过好几个了，非常感谢他。这是个很好的科学家，不争名利，潜心研究，并为同行提供帮助，很让人钦佩啊。http://life.xmu.edu.cn/hancDNA/Query.aspx( L% |! S' D- @1 |7 }8 y4 R
索要基因时的要求是科研院所或大学的教育邮箱可以索要，商业邮箱不能索要。索要时有程序，按照网上提供的程序就可以了，免费的，邮费自付。我帮你查了，他有这个基因，你可以要得到。

wangyashuai

全长cDNA不是说是一个载体中连全长cDNA，而是一个文库，包含许多载体，每个载体上会连一段cDNA，其中包含全部基因的拷贝。你只要建一个全基因组cDNA文库，然后从中间扩增你要的基因就行了。扩增全长cDNA主要是看mRNA两端的扩增能否实现，所以一些公司会在随机引物中加上寡聚的T，用以得到5‘的全长cDNA。