关于小鼠间充质干细胞的消化问题

fluleaf

有人说小鼠间充质要比巨噬细胞和成纤维细胞容易消化，在0.15%胰酶作用下迅速从培养板上脱落下来（《干细胞与肿瘤》，陆士新，2009），可是也听说小鼠间充质也很难消化，用0.25%胰酶10min都难以消化下来，那真正情况到底是怎样啊？; S+ U. S1 A! [! _
今天试验的时候，的确分成两部分，一部分细胞铺得很开，呈多角状态；另一部分很难消化，呈短梭状；这样的话，我用消化的方法纯化，该取容易脱落的一部分，还是贴壁很牢的一部分？5 H  p% r5 S( H, y2 m0 Z2 J# t
求讲解！

liluli0715

我做的人的间充质干细胞，消化前要用缓冲液洗下培养基，除去牛血清再用0,25%胰酶消化3min一般都可以消化下来，如果消化10min，细胞还不容易脱落，建议不要这类细胞，胰酶作用越长对细胞的伤害越大。或者你可以把先消化下来的细胞收集培养，那些很难消化的细胞留在原瓶继续培养，观察两者的形态，增殖能力有没有区别。

king8

       不知道你培养的是什么间充质干细胞：骨髓？脂肪？脐带？。。。。。针对不同来源干细胞，消化难易程度相差很大。相对来说，脐带间充质干细胞，脂肪间充质干细胞消化相对容易!但是，骨髓间充质干细胞很难消化！而且，大鼠小鼠也有很大的差别。如若是转基因鼠的骨髓间充质干细胞更难消化！！！！建议放入37℃消化！总的来说，不同情况应不同对待！! ^. F' a; X  }) u2 |$ V
       第二个问题的答案是去容易的部分消化！

chuangwaidetian

消化前应用PBS清洗细胞，去除残留培养基，胰酶的温度最好是在37℃，这样胰酶的消化能力最佳，我之前做过大鼠的骨髓间充质干细胞，0.25%胰酶+EDTA消化，大概3～5min就可以了，中和胰酶之后，要用消化液轻轻吹打一下培养瓶底，把残留在瓶底的细胞都洗下来，但是动作要轻柔。有时候消化的时间到了，但还可以看到一些细胞贴在瓶底，这时候你只要轻轻拍拍瓶底，就会发现这些细胞中绝大部分就都浮起来了，所以千万不要消化时间过长，否则，对细胞的伤害会很大，传代之后细胞会死很多。希望对你有用！

beginner

我的小鼠脂肪间充质不用1分钟 40秒左右就可以吸掉拍打了。你说的多角状是有一点分化了，不过似乎做诱导什么的问题不大

fluleaf

回复 king8 的帖子
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多谢指教。做的是小鼠骨髓间充质。P1第一天形态还很好，梭型细胞挺多，结果第二天有许多很扁平很多角的形状了。。

king8

回复 fluleaf 的帖子9 \( J6 ^$ ~* S5 R0 I' b3 w4 k; D: |5 p

1 X3 L5 A/ C/ r1 P1 [应该是细胞不纯！

signext

fluleaf 发表于 2011-12-15 10:33
3 U. ]) W) E+ M4 {回复 king8 的帖子$ I, a) j5 \3 ~/ ]) ~
' J( @( T+ K) b: `6 p4 M
多谢指教。做的是小鼠骨髓间充质。P1第一天形态还很好，梭型细胞挺多，结果第二天有许多 ...

  L; U# G2 A8 r* ?  ~9 n& \1 }5 K细胞变异了－－很难说小鼠的间充质是哪种 它太杂了$ O& T$ y0 E; a: Z. F$ w4 N$ u
以为是干细胞，谁知道呢
6 W* j7 W6 W7 f) W$ S/ E. w4 x6 Q& D2 |7 S
我做过验证，0.25胰酶和0.02EDTA消化约3分钟，下来大多数，培养良好，应是BMSC，还有约10%没有下来，原瓶培养十余日，这些细胞生长极缓慢，形态更怪异，应该不是干细胞了。小鼠。

zhj1988

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, S: s' Z+ o0 e9 Y0 l" W8 O& k- v: u0 @! _' n1 A
我做的是小鼠BMSC，胰蛋白酶液自己配的，胰蛋白酶粉0.25g, EDTA 0.02g, 100ml D-Hanks液，消化不到一分钟就下来了。现在还在养呢。

漂泊的风

我也在做小鼠BMSCs，原代太难消化了，细胞就是不下来，郁闷，以前做大鼠的和人的BMSCs都是很好消化的