求教ES转染小RNA

歪歪

有人做过ES的RNAi实验吗，是否需要用无feeder的ES培养，用哪个试剂，怎么转的？

echowdk

回复 歪歪 的帖子, I* u  n' K: M6 Z! N$ q
" S6 g# y0 y* I) ?% \- b
你的小RNA是siRNA还是shRNA。- j& ?: f7 h+ B8 K3 W+ P% C6 l2 s
我就做过shRNA的转染，而且shRNA的载体是普通的载体，不是病毒的。0 v# `0 u1 G& ]. L$ n7 I
我就用lipofectamine2000，跟普通的ES细胞转染一样。
( e7 ?% K8 ?* J/ h铺不铺feeder都可以，看自己实验习惯，只要对照组和实验组一致就好了。2 y% a3 c" S7 m9 w, }
要是siRNA转染的话，自己找paper看一下吧，应该有很多的。
, e% m- k! D0 K8 F* f) `

sciencezhu

请教下echowdk,最近mES养的状态很不好，是在Feeder上养的，能否给点提点啊？还有，如果转染或者感染ES，用什么载体效率会比较高啊？谢谢了
, Q$ O1 t5 O. v/ W0 b* G# ~6 `

fananran2003

回复 echowdk 的帖子
5 _& j; ^7 L# v9 S9 h* H1 G2 `+ i" j. b# J+ q0 l$ x6 v2 n( b
请问一下你们ES的转染效率能达到多少啊?

echowdk

回复 fananran2003 的帖子9 Y# i9 j! t& H3 c
5 C0 |" C  D. ]# K
用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90%+的样子。

秋槟茗

echowdk 发表于 2011-12-19 12:50
8 T0 }% M' }  c2 V回复 fananran2003 的帖子6 i- S! s" z# q, O0 g4 Z) B

8 ~# ^/ N+ R# }5 k+ M2 Z+ p: @用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90% ...

8 [5 o  D# p$ U% J" T0 s$ p
请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

秋槟茗

回复 echowdk 的帖子
6 Y4 t. }6 J& z( t9 a$ F* J. k" A" s2 ]" n7 W' o
请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

张月儿

搜Efficient gene silencing and cell differentiation using siRNA in mouse and monkey ES cells这篇文章，写的挺详细的。

gscao

回复 echowdk 的帖子
6 I, T0 E- w4 _* f$ c$ A% R0 [
% G; P3 ~+ W/ N( Y; c我们小鼠ES细胞转染效率远没有那么高，即使用核转染仪，转染效率也才达20%，我们用流式细胞仪分析的，这说明你在这方面是真正高手。你能否提供几点建议来提高ES细胞转染效率。谢谢！