关于MSC贴壁细胞的消化，请教各位老师

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我们用浓度为0.25%的胰酶稀释到浓度为0.05%去消化细胞的时候，为什么感觉细胞消化下来了，但是细胞与细胞之间好像没有分离，并且消化下来后有很多细胞聚集在一起吹也吹不散呢？是浓度低了还是高了啊？求解？？？？？？？？？？

signext

原代吧？ 原代相对更难消化，你用的还没有EDTA，还是0.05%
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我一般是0.25胰+0.02E，室温2分钟即可。原代的话3分钟。: X& L; b- `+ a
如果吹打不下来的，就不要了，那多半也不是干细胞。

大少爷

成团的现象是正常的，多次吹打，100微米滤网过滤

大少爷

成团的现象是正常的，多次吹打，100微米滤网过滤

shuishanglingzi

我也是用浓度为0.25%的胰酶，稀释到浓度为0.05%后去消化细胞的，放在37度五分钟即可，成团的细胞吹打吹打就散了。你在消化前有没有用D-hank's清洗下，如果瓶内留有营养液就很难消化的。

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基本每次消化的时候都是放在37°消化的，正常的时候基本都在3-4分钟就能消化下来，显微镜下观察能看到细胞变圆。但是有时候就是消化时间要很长时间还有消化下来细胞都成团的在一起。吹打以后还会有个别的细胞吹不散。。。

gact

按照步骤操作，，不用稀释，建议用EDTA，拍打消化，1min之内就可以下来。

zhanglei1414

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, _" J* R+ _$ [) C- y7 B买正常的0.25%的胰酶，稀释5倍，消化前先洗一遍，加进去胰酶室温消化就可以，你等细胞都消化成单个的，用手拍一下瓶子，细胞自己就掉下来了，而且还是单个的，还用吹打吗？低浓度胰酶没什么事不用怕消化死了，你说的成团的消化不开，估计是已经长成团了吧？那你能消化开了吗？不管是华通氏胶，还是骨髓小粒你都别指望单纯的胰酶就能消化成单个的细胞

sanfa

gact 发表于 2011-12-22 23:37
6 R( ?4 k% l- [& S按照步骤操作，，不用稀释，建议用EDTA，拍打消化，1min之内就可以下来。

# i, A7 w+ a$ T. O
同感

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谢谢各位了~