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[请教] 请问表达蛋白的细胞大量死亡后,培养基中会有什么变化? [复制链接]

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楼主
发表于 2011-12-28 21:33 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请问,表达蛋白的细胞大量死亡后,培养基中会有什么变化?比如ph值,OD280/OD260的比值是不是会降低,细胞会释放什么?释放的东西对表达的蛋白造成什么影响?谢谢!
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沙发
发表于 2011-12-28 21:43 |只看该作者
补充,应该是细胞大量凋亡

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藤椅
发表于 2011-12-29 18:52 |只看该作者
没人理我哎

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板凳
发表于 2011-12-29 20:37 |只看该作者
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不太明白你说的问题,你是指用于表达外源蛋白的细胞大量死亡?还是体内的细胞?如果是前者,应该就不是凋亡,我觉得如果这些细胞大量死亡的话,肯定培养基中肯定是被释放了大量的蛋白质的,当然核酸也会有,而至于pH值还有OD值什么的,这个应该很难说,毕竟细胞不同,表达蛋白不同,蛋白量不同等等,这些都不一样,你更该关心的是,这些表达的蛋白质是否会被降解掉,或者有正常的活性能被回收回来。由于不太理解你的问题,所以可能回答也不准确!
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报纸
发表于 2011-12-30 11:17 |只看该作者
回复 langziforever 的帖子) u5 Y  I, F! c; K. b6 s( U# c
3 |" R# k) M) n
谢谢您!我是指的表达外源蛋白的细胞大量死亡,上清经亲和层析后,洗脱下来的蛋白高的有些不像话,上清OD280/OD260与洗脱下来的OD280/OD260是相反的趋势,前者越低,后者就越高。不知什么原因,困惑中……
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地板
发表于 2011-12-31 20:09 |只看该作者
回复 huahua2008 的帖子
/ ?. [8 \) I* H
4 M! r6 K5 D1 n8 P$ w9 w我是否可以这样理解,再上清中,蛋白质主要是主导A280的,而核酸类物质导致A260,那么在为纯化的上清中,由于细胞大量死亡,肯定有很多再A260处有吸收峰的物质存在,而导致A280/A260,那么在纯化后,通过你说的蛋白高的不像话,说明你纯化效果非常好,进而就导致了去除A260物质效果明显,所以,你前面的上清存在越多的A260杂质,那么你纯化后由于去除了这些,就导致相应的比值越高,其实对应的可能是你纯化的蛋白浓度越大,同时由于A280的蛋白和A260的核酸都是在升高,所以,也意味着你细胞死亡的越多,但是细胞死亡所释放的A260物质要明显多于A280,就导致了你所观察到的现象!不知道我清楚表达了我的意思没有,这只是我的一个猜测哈!
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发表于 2012-1-2 22:16 |只看该作者
本帖最后由 张也行 于 2012-1-2 22:18 编辑 ! |/ g$ s1 @; J: P

/ ?- g( J7 s2 P2 c7 O/ G8 g回复 huahua2008 的帖子' {! [1 z+ e5 w; g
& ~# \( W! `2 B3 B' A. H3 K
langziforever说的已经很清楚了。从你的介绍可以看出你表达的是分泌型的蛋白吧。如果你查一下教科书的话就会发现,细胞凋亡的过程中会降解核酸,如果跑胶的话还能形成典型的DNA ladder。你的结果说明你的纯化过程很成功,如果你对收到的蛋白质浓度觉得不可思议,你可以跑一下Western,确定一下。不过你的OD280/260只能说明你收到了很多蛋白,但是你目的蛋白的纯度不一定就很高,和你层析时的条件有关。
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发表于 2012-1-4 12:18 |只看该作者
各位大虾,俺是否可以弱弱地问一句,那个,细胞表达蛋白后都会大量死亡或凋亡的吗?我做的是诱导脂肪干成骨分化,诱导后细胞会表达特异性蛋白;我的实验的确有,诱导后细胞死很多的现象,是不是可以说可能是蛋白表达的原因呢?
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发表于 2012-1-5 01:08 |只看该作者
回复 franty 的帖子
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