请问表达蛋白的细胞大量死亡后，培养基中会有什么变化？

huahua2008

请问，表达蛋白的细胞大量死亡后，培养基中会有什么变化？比如ph值，OD280/OD260的比值是不是会降低，细胞会释放什么？释放的东西对表达的蛋白造成什么影响？谢谢！

huahua2008

补充，应该是细胞大量凋亡

huahua2008

没人理我哎

langziforever

不太明白你说的问题，你是指用于表达外源蛋白的细胞大量死亡？还是体内的细胞？如果是前者，应该就不是凋亡，我觉得如果这些细胞大量死亡的话，肯定培养基中肯定是被释放了大量的蛋白质的，当然核酸也会有，而至于pH值还有OD值什么的，这个应该很难说，毕竟细胞不同，表达蛋白不同，蛋白量不同等等，这些都不一样，你更该关心的是，这些表达的蛋白质是否会被降解掉，或者有正常的活性能被回收回来。由于不太理解你的问题，所以可能回答也不准确！

huahua2008

回复 langziforever 的帖子( K( E$ V4 h3 O. G6 m
( ?* V4 t! ]& n$ U5 v% ~
谢谢您！我是指的表达外源蛋白的细胞大量死亡，上清经亲和层析后，洗脱下来的蛋白高的有些不像话，上清OD280/OD260与洗脱下来的OD280/OD260是相反的趋势，前者越低，后者就越高。不知什么原因，困惑中……

langziforever

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. l- a6 h! f/ @7 M4 j0 S. t) O( X! s
我是否可以这样理解，再上清中，蛋白质主要是主导A280的，而核酸类物质导致A260，那么在为纯化的上清中，由于细胞大量死亡，肯定有很多再A260处有吸收峰的物质存在，而导致A280/A260，那么在纯化后，通过你说的蛋白高的不像话，说明你纯化效果非常好，进而就导致了去除A260物质效果明显，所以，你前面的上清存在越多的A260杂质，那么你纯化后由于去除了这些，就导致相应的比值越高，其实对应的可能是你纯化的蛋白浓度越大，同时由于A280的蛋白和A260的核酸都是在升高，所以，也意味着你细胞死亡的越多，但是细胞死亡所释放的A260物质要明显多于A280，就导致了你所观察到的现象！不知道我清楚表达了我的意思没有，这只是我的一个猜测哈！

张也行

1 H0 z- R, ~4 V

- h4 _. F4 a* p" V8 m回复 huahua2008 的帖子9 q7 u) }' T4 c3 i

0 O8 V  l3 f' h) G3 Blangziforever说的已经很清楚了。从你的介绍可以看出你表达的是分泌型的蛋白吧。如果你查一下教科书的话就会发现，细胞凋亡的过程中会降解核酸，如果跑胶的话还能形成典型的DNA ladder。你的结果说明你的纯化过程很成功，如果你对收到的蛋白质浓度觉得不可思议，你可以跑一下Western，确定一下。不过你的OD280/260只能说明你收到了很多蛋白，但是你目的蛋白的纯度不一定就很高，和你层析时的条件有关。

franty

各位大虾，俺是否可以弱弱地问一句，那个，细胞表达蛋白后都会大量死亡或凋亡的吗？我做的是诱导脂肪干成骨分化，诱导后细胞会表达特异性蛋白；我的实验的确有，诱导后细胞死很多的现象，是不是可以说可能是蛋白表达的原因呢？

细胞海洋

回复 franty 的帖子1 T3 p5 v  `. U" m

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