全骨髓培养法提取间充质干细胞成纤维细胞占优，怎么回事？

bnm789

全骨髓培养法提取间充质干细胞（120g左右大鼠） ，直接用10%GIBICO血清培养基冲洗骨髓腔，不离心，然后直接接种，提了好几次，最后养的细胞感觉都像成纤维细胞，细胞很透亮，形状不规则，很多突起，长个两三代就不行了，不知道怎么回事？请大家指教

漫游天龙八部

大鼠月龄如何，建议使用幼龄或新生大鼠，另外培养液内加因子，不过加什么因子，我当时是实验室老师做好了，我直接用的，现在想不起来了。

signext

bnm789 发表于 2012-1-11 20:59 + ~6 O: U' {3 J& B4 }! b
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) M+ i& P) K* T4 q9 q4 D6 @! Q4 I9 n6 M
不是成纤维细胞吗？用bFGF 0.5ng/ml怎么样

/ K/ m5 s: s5 ~( ~  E6 p7 D# v! A大鼠的 没这么麻烦的( b' T2 d" y+ I" M0 G

0 N; y  v8 x& I2 u' z: x取；四周龄一只 双侧股胫骨 无血清培养基或PBS反复冲洗
2 n( L! {4 L& j5 i9 E0 O1 @ 莫起泡
3 ]" V, _5 O: k$ P过滤一下 离或不离心 DF12+10%GibcoFBS 双抗 L-谷4 t0 r! }. J2 i/ p
培养
; w3 Q' H( E/ b8 b. {次日全量PBS洗数次全量换液，此后隔两日一换) ^1 N" Y2 q4 Z* F4 y* w
80%以上时传代，首次1：2，再传可1：33 s7 z+ {% z* y: b
0.25胰酶首次3－4分钟，此后1－2分钟，37度
. p/ O& l; X5 Y7 \/ I不加EDTA，故亦不必离心
$ S; E! A' f# }* Q- b+ b" T难以消化者为上帝不喜者  L$ B# L; h. f* ]1 \* o
弃0 _0 B7 r4 N: u2 F* w! \! V
勿疑。此法可使之传十代，十代之后，年老色衰，已无当年风华

bnm789

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% c0 I0 X" m! }/ }: h* ~4 W不是成纤维细胞吗？用bFGF 0.5ng/ml怎么样  

zarecol

从细胞形态来看，像是老化或者分化了。骨髓间充质的话最好加入细胞因子，培养传代消化时间不要太长。

冰枫de梦

好像是细胞老化了，我提过的小鼠脂肪间充质干细胞和你的差不多。消化时间不要太长，培养基里加些细胞因子可能会好些吧

bnm789

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/ A' t4 ]* t- w. g7 O, y
7 q8 O7 }" x4 |! C容易消化

bnm789

回复 zarecol 的帖子! @6 I: D$ g# o; r1 T: H4 y4 u  }
' x0 U9 p# `0 T+ o4 v' Y
已经上图 ，请指教

bnm789

1 P; [6 n  |$ k- l

( c3 [/ M8 s, }, i) }1 t* j4 s回复 zarecol 的帖子
1 N( z8 [6 L. l7 m' W4 D6 A/ R5 r. H9 F

chenyuemily

那你消化的时候容易吗？如果是成纤维的话3天一传代，应该很难消化吧