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求油红O原液配制详细方法
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作者:
冰枫de梦
时间:
2012-1-10 09:35
标题:
求油红O原液配制详细方法
我是将油红O溶于异丙醇中，但有时溶解不充分有少许沉淀，求解。
作者:
zerollx
时间:
2012-1-10 10:09
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冰枫de梦
的帖子
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8 @# M, L! |' a: Y
溶解不了是正常的，稍微颠倒混匀个5~10min，再沉淀一会，直接取上清过滤待用就可以了
作者:
tjbone
时间:
2012-1-10 10:14
1.染色液的配制:
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材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
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称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。
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2.10%中性甲醛的配制
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材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶
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称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。
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3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
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4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。
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5.染色步骤：
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5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
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5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。
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5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。
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5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
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5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
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5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
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5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
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5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
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5.9 显微镜观察。
作者:
mansnoopy
时间:
2012-3-10 11:03
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冰枫de梦
的帖子
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你溶完后需要过滤的，千万不能直接用！
作者:
冰枫de梦
时间:
2012-3-10 16:59
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mansnoopy
的帖子
8 B* O% c: E4 r5 I: L+ `7 |
( W( M8 z, m' m [% y8 V: j3 c
谢谢 呵呵
作者:
hhxxattxs123
时间:
2012-6-22 08:16
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tjbone
的帖子
" g2 B9 Z* y$ ]
1 J' i* L8 s0 Q! G' L
过滤的时候，用什么标准的滤器啊？
作者:
天枰2012
时间:
2012-6-22 09:23
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hhxxattxs123
的帖子
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, w9 I& r3 l7 ^* W. o% v/ B1 E1 k
用滤纸
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