qPCR大家关心的是神马？

sirius_zou

1.qPRC我关心的是重复性和灵敏度，复管之间CT值差异关系到SD 值，也关系到实验的精确度。灵敏度的话主要是通过标准曲线体现出来。/ S3 e7 S3 S. a, U% {: ^0 k
2.理论上待测样本10倍稀释后CT值相差3.3，但实际不是绝对的，只有尽量接近3.3，高于3.3说明样本或反应体系里有PCR抑制剂，比如RNA提取时酚氯仿是否去除干净，低于3.3说明扩增效率高于100%，可能是整个体系原因，也可能是引物非特异性扩增。
1 G) D% E8 o, a$ i7 Q3.关于样本：RNA在-20度下是很难保存的，LZ可以跑琼脂糖电泳看看条带，如果是两步法qPCR最好将RNA及时反转录。; ?/ q1 T4 i0 p
4.关于荧光值低的问题，我以前也遇到过这个问题，用不同公司的试剂荧光值差异很大，还有就是方法的影响，LZ用的是probe还是SYBR？LZ的荧光值才0.5确实太低了，基本可以忽略不计，应该不是mix的原因，可能还是RNA降解了。重提RNA试试。