miRNA转染后其表达量的变化？

coffee

各位同仁。) `9 v7 t  W( v
我选取的是抑癌作用的miRNA,我对两种细胞株进行转染后，24h时测提取RNA，测PCR，miRNA在其中A细胞株中呈高表达，在另一个B细胞株中呈低表达。48h后提取RNA，测PCR，结果提示：两个转染后细胞株相对于各自未转染的细胞均呈降低趋势。. L; b$ y$ T2 e% H! K: H
实验前的假想是，转染进入细胞后，miRNA的表达量会增加。但是结果基本相反。
. p; F3 z# ~: O0 i" g当然，荧光照相时，发现细胞比较多，有部分细胞出现漂浮现象。: m1 s+ T' B' o# \' s
试验后，对于表达量降低，我起初的解释是，miRNA抑制了细胞的增值，从而导致其含量降低。但是我又觉得miRNA引起的抑制作用可能不如细胞增值的速率快，因为整体看，48h的细胞总数要多与24h。1 u6 k( T2 ]# h0 j/ ~
我目前还没找到合适的解释，希望各位同仁能各抒己见。谢谢。

Yedan

转染效率大概多少？还有你收细胞的时候，细胞多密，是24h就很密了呢还是48h收的时候，细胞如果24h的时候就已经confluent，细胞状态就不对了，会影响结果的，所以你铺细胞前就得想好。
3 T* k+ B; {0 i  N, G3 V这两件最基本的东西先确定下来，再讨论定量结果，不然说再多都是后话。

zhucexiaji

做荧光定量PCR，别做PCR，PCR跟你模板浓度有关系的，模板高（mRNA含量高或细胞多）会使条带亮，如果你用荧光定量PCR，那么上面讲的因素都 可以通过参照来协调，这样就会显示你真实的miRNA表达量了。