急求细胞脱落后死亡的原因

snowny007

脐带间充质干细胞（贴壁法），原代培养，培养20D后传至P1，使用Sciencell无血清培养基，接种密度为5.8*10^5/T175，细胞贴壁3日后只见极少细胞发生增殖，5日后全部脱落。使用0.125%胰酶消化4min。无细菌污染。
0 i! ?8 X0 G: a8 t5 [! h第二次：原代培养，培养15D，使用Sciencell无血清培养基，细胞融合度达到65%/T75，细胞总数为1.2*10^6/T75，当日全量换液后，第3日观察是大量细胞脱落，细胞活性检测为50%，无细菌污染，求高人指教啊。暂无图片

snowny007

胰酶消化是指传代时消化条件

sanfa

你原代培养时间好长啊 细胞老化的太厉害了吧

snowny007

可能吧，但贴壁法一般都比较长得啊

sirius_zou

应该和你的接种密度，培养时间有关。4 _/ ^. k0 m/ p
是不是培养时间太长了？多久换一次液？
2 y2 n; F( P8 m6 D  g- r+ q% LT75接种58w cells不算多
  i! f% T0 u# H- v' e4 I我做过一次MSC，T75接种70w cells，2days 后细胞边缘开始脱落了

zarecol

额，你使用的无血清培养液，你用什么终止消化的？

zarecol

如果是你的培养液，那是起不到终止作用的。

ziyunfei1982

干细胞培养最好别全量换液，另外你 的原代细胞长的时间太长，我认为有问题。, ^3 ^  y. n$ N9 b
取原代细胞时有问题，细胞是从组织爬出来的，还是你用酶消化成单细胞悬液的？1 z3 a6 \' b) G  n
细胞活力不好？还是取下来的脐带时间太长了？总之你原代长的时间有点长，间充质原代7天足够长满，按1000000每毫升的密度接种。8 W- b% H% d1 V6 H% r2 [" d* W
再一个就是考虑你的培养基的问题。无血清培养基应该加生长因子的。最好弄清你培养基的所有成分和作用。培养瓶的界面也有一定关系

snowny007

谢谢各位，使用的是Sciencell原培养液终止，细胞是从组织块里自己爬出来的，所以生长较慢。买的是SCiencell成品培养基，配方不清楚。可能我的时间太长，楼上的能分享下你的培养方式吗？贴壁式和酶消化法皆可，谢谢了！