应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞

xbqian

我们采用低浓度的胰酶、胶原酶及透明质酸酶三种混合酶过夜消化去除血管的脐带，效果挺好了，一般十几个小时消化效果较好，而且终止消化的时间要求不是那么高，下游的传代培养效果也不错，技术稳定。我觉得大家可以试试。

ditiger

个人认为胰酶浓度也很重要，0.25%太大，细胞在半分钟内就能消化下来，而且非常容易消化过，导致细胞成团，或老化，我们一般用0.05%，效果挺好。

manycells

同意楼上的。PH的平衡系统还是需要好好调整

sdwzg119

样脐带MSC大约有一年了，脐带总有个差不多几十了吧，谈谈一点心得：% |4 Q! R1 i; ]$ [+ w  T
一直用贴壁法样脐带MSC没对比过酶消化法，不过总体上感觉贴壁法还是挺不错的，得到细胞的时间和质量大体上能算稳定。8 F" j6 j' I! h4 _& o4 a- a) P
培养得到的脐带MSC的确是有好有坏，刨除操作等人为的原因，我个人认为脐带本身之间是有很大的差别的，不光是状态和生长速度及能传的代数，连流式结果都相差甚远。当然，技术好的人能比别人养的好，我曾经一个细胞培养到20多代，细胞状态仍然和原代形态差不多，但是大多数时候也就养到10代就状态不好了。* ~7 f0 o' }( w8 Q+ ~& I9 t
还有就是养细胞一定不能太懒，不能等细胞长的十分满以后再传代，哪样很容易老化，也不能传代的时候为了省事传的很稀，哪样也不好，有人说应该前几代高密度，后面低密度。
% b, z& f: [: w$ ^7 m总之我的经验是不但方法要对，态度也要端正，要小心翼翼的伺候细胞，有时候感觉养这玩意比伺候爹娘和媳妇都费劲....................) Y; o" }% R% D6 O3 D5 _

3 t  e$ e  u7 S+ g5 D& }还有楼上说的培养基变黄很快，我感觉要么你是污染了，要么你就是培养基PH平衡系统不好。干细胞要是等到培养基变色了哪还怎么活啊！哪么娇贵的东西。

shashou_com

“传代时采用0.25%胰酶37摄氏度进行消化，终止消化采用等量血清。”- i: V& R, X& x* ^
用酶消化法消化细胞时，必须随时在显微镜下观察细胞被消化情况 ，若细胞质回缩，细胞间隙
. ], u( g- c# b( s& y增大或有个别细胞漂浮起来时，立即吸掉消化液，加入含血清培养基，终止消化。