应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞

sdwzg119

样脐带MSC大约有一年了，脐带总有个差不多几十了吧，谈谈一点心得：% @' U# K5 R) \1 }. g% e
一直用贴壁法样脐带MSC没对比过酶消化法，不过总体上感觉贴壁法还是挺不错的，得到细胞的时间和质量大体上能算稳定。; v' z+ g$ d+ A& Q2 Z; k& {
培养得到的脐带MSC的确是有好有坏，刨除操作等人为的原因，我个人认为脐带本身之间是有很大的差别的，不光是状态和生长速度及能传的代数，连流式结果都相差甚远。当然，技术好的人能比别人养的好，我曾经一个细胞培养到20多代，细胞状态仍然和原代形态差不多，但是大多数时候也就养到10代就状态不好了。; t0 T1 b2 l9 z0 j& U
还有就是养细胞一定不能太懒，不能等细胞长的十分满以后再传代，哪样很容易老化，也不能传代的时候为了省事传的很稀，哪样也不好，有人说应该前几代高密度，后面低密度。6 y7 F3 L! J( x8 z8 w  H) V1 N3 S
总之我的经验是不但方法要对，态度也要端正，要小心翼翼的伺候细胞，有时候感觉养这玩意比伺候爹娘和媳妇都费劲....................
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还有楼上说的培养基变黄很快，我感觉要么你是污染了，要么你就是培养基PH平衡系统不好。干细胞要是等到培养基变色了哪还怎么活啊！哪么娇贵的东西。

sdwzg119

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+ ^5 j( ^3 |) J1 T针对消化来说：我个人感觉一直在显微镜下观察为好，一直看到细胞回缩明显，轻轻拍拍细胞就会悬起来，但是这也是经验之说，细胞之间是有差异的，总之我现在的做法是尽量短，即使是放入培养箱37℃消化也是1分钟拿出来看一眼，确保没有消化过头。我用0.05%的胰酶，一般多数拿到显微镜下消化就差不多了，在有就是放入培养箱1分钟，最多消化3分钟。
/ }! O( p% ]! b) I) v传代据说80%最好，可是这谁能控制的住细胞的长势呢！！！经常今天看着不到80%，明天就长过了！头疼！一直头疼！; h6 H5 `2 W2 x