准备做一下2i+B27，无feeder培养mES

igdb

准备做一点无滋养层的ES培养工作，打算先试一下DMEM+LIF+2I+B27的配方，大家有什么建议嘛？另外，2I和B27的浓度用的是多少，具体是怎么配置的，自己还拿不准，还请大家提出建议。。。
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2 O; V& }, O" r0 u$ m  实验结果会和大家随时分享的。。

jessewill

是mESC还是hES呢，我养得mESC,无饲养层，第二代就不行了，没有加2I，其他的跟你一样

igdb

回复 jessewill 的帖子5 q* l  b+ ]+ i. E: i4 l* m8 I' n
0 {6 o6 U) L5 l4 E- O  A2 Q. _! i
我养的mES..   听说加上2i和B27可以做到ES的无限传代。。我想试一下，具体这几种试剂是怎么个配法，我还有点拿不准。- P1 h7 ]- H' {2 _& _  p

shangchunhua

回复 igdb 的帖子
- |  G# @* H0 H$ F! n- k7 `  R& P: {1 e7 D
楼主买的哪家公司的2i呢？你这个培养基的配方我还没有看到过啊，是已经发表的文献中的吗？

igdb

回复 shangchunhua 的帖子3 t. O" ^3 i9 q( c5 e( p/ A

7 ]3 l% `/ u2 S4 B# [0 }我在MERCK买的。。那篇GROUND STATE的文章里有用过这个组合吧。。另外也听别人提起过。。

shangchunhua

回复 igdb 的帖子
& o! b2 g* ~3 i& R3 q4 o! z* s& M2 z: }% n$ U0 F; b  L4 `1 \, l5 z+ o3 ?
楼主做的怎么样啦？可以分享一下吗？

igdb

回复 shangchunhua 的帖子4 \0 }$ U8 ?4 I5 T! `  Z5 Y2 d

& W6 l' }& K$ F# s8 f1 }2 K" p" o挺好的，我觉得。。

shangchunhua

回复 igdb 的帖子
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& R! t0 Q2 {! y( ?6 M3 u: I知道啦，多谢！

holywater

我虽然重点不是干细胞，但是我对B27用过很多
; p3 n: \2 `' m) Q9 W
& e+ l- D% a( q( o, K* K' d其实你可以试试neurobasal+B27
, M# H. y  v+ ?1 a# C1 P
4 u: x" r+ p8 F( y9 l我说下自己的经验：
$ `- m: L3 j7 b0 \3 }$ E
! A! f( h% h3 N' `, Z8 t: w" x2 P1 FGF2对成纤维细胞有强大的刺激分裂作用，请确保分离时候别带入过多的成纤维细胞2 e  x( `6 V# F/ ~

1 J4 P+ ~, ]7 ~6 E, `6 I2.由于FGF2 用量很低，有的EP管子会吸附蛋白造成FGF2浓度进一步降低。解决方法是配制FGF2溶液时候先向其中加入一定浓度的BSA
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/ M6 \# Z) Y6 g0 h& C: h" s详细情况请看invitrogen的说明书，我记得是一定浓度的TRIS-HCI加BSA4 C: h5 {( M: A, _+ i; M
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3 FGF2容易被血清之类的东西灭活，所以记得看看有没有冲突。

holywater

啊，抱歉，我以为是养神经干细胞呢。。