胶质瘤肿瘤干细胞

xiaqs2002

大家有做原代胶质瘤干细胞分离吗？. @9 {! Y: i6 n$ X" C$ W

' q5 `, k% y' [0 Y3 c& U. F# }一起交流交流经验吧！

xiaqs2002

大家好！
( m+ g: z) c, j: ^/ p我最近尝试从ren胶质瘤样品中分离胶质瘤干细胞，把组织减成肉糜后，用胰酶消化了30-60min，吹打混匀，过200目筛子，接种在DMEM/F12 B27,EGF bEGF(各20ng)培养基中培养，到现在已经有2周时间了，中间发现了不少贴壁细胞，一直没有明显的肿瘤球长出，只有些疑似的球状物（后面我补照片），感觉像细胞碎片团堆积或者是消化不完全的组织块，而且疑似球状物大小也没明显变化，感觉不像。 有几点疑问，和大家交流甲流。: d; k/ {2 O( v0 Z, o
1.消化时候，用胰酶是否太强烈了，我看到有的胶原酶或dispase等+ _  D! a, m! R5 v8 p$ Z# w
2.过筛我是参照文献用的200目，我感觉用400目应该会更好些，因为可以去掉未消化的组织块。
3 q) ~) b* a3 S4 J1 J  s7 z3.如果长成肿瘤球，一般多长时间可以长出，多长时间没有肿瘤球长出的，就可以放弃实验？
# y2 j% E+ d" S- [; G$ ?  D: ?( J4.贴壁的细胞一般是什么细胞，有保留的价值吗？
% G; L% ?7 E' o; w8 m# d* W2 f2 j6 S+ N希望和大家交流交流！" g$ b$ d& {: {) j* ~

xiaqs2002

由于最近比较忙，没有上论坛！
6 Q/ |( o1 T4 y1 ]' S& l0 _' h非常感谢你的建议！
% m- E. J, T  ^7 _7 M% ?我还在继续分离胶质瘤干洗吧，前一阵总共分离了10例胶质瘤瘤样本，有三例长出了肿瘤球，目前正在鉴定中，结果还可以。4 h, y2 ?7 g% V( q) b" x- G
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我的经验是胰酶消化还是可以的（30min以内），但可能会损伤偏大，我后面准备全部换成罗氏公司胶原酶和dispase酶消化。
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我观察到的是长出球也就3-4天，如果超过一周没有球长出，基本就长不出来了。6 y+ D9 C' g$ f0 D) q% ^
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我后续的实验过筛都是用BD 40uM的筛子，感觉还可以。
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9 ^3 h" {# G( ?另外一个经验是用的组织不要太多，尽量剔除坏死组织和血凝块。1 N" ^# z5 \0 m. t; n6 s

. Z) ?0 D! g+ H* ^% t* o3 V9 ]我用的都是新鲜组织，冰的hanks液保存，术后两小时以内分离，我感觉冻存的组织应该不行，没见过文献用冻存的组织分离过。& G# q5 ~7 j2 ~* D  o0 G5 y, _1 f' Q/ K+ k

, S3 b, q8 B( C5 Q1 _4 [, L2 |欢迎多交流！
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