脂肪干细胞怎么提取

mirrida

脂肪干细胞怎么提取？我们实验室的一直用3T3 L1研究糖尿病，但我想提元代细胞做，操作有什么注意的？

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1）要注意材料的新鲜和保鲜4 N( q' S; `4 v  U( w3 f" X8 w
（2）取材应严格无菌
# L. S7 e+ T: u4 T" t8 Q; O（3）取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械9 u* N5 `! I7 N" j1 S
（4）要仔细去除所取材料上的血液（血块）、毛发，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行
# r( L1 [% T% P6 E9 {（5）取材应注意组织类型、性别、种系、年龄等8 I, H! b+ e- H

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以下方法引至丁香园，感谢这位战友提供，但你要提取脂肪干细胞的话，还是应该查阅目前最新的文献，看能否找到权威的方法7 _- l' v7 {( j( G8 ?5 n3 L
吸脂术时用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织20 mL. 在1 h内将其移至离心管内，加入等量PBS缓冲液，充分振荡后低速离心800 r/min×10 min. 反复冲洗3次后加入等量15 g/L I型胶原酶. 37℃水浴中充分振荡30 min，再加入等量胎牛血清（FBS）中止. 低速离心10 min后弃去上清. 将下层细胞用PBS悬浮后加入16 mmol/L NH4Cl 37℃水浴中10 min以裂解红细胞. 低速离心10 min后再用PBS冲洗3次. 最后将细胞用含100 mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中，37℃，50 mL/L CO2培养箱中孵育，48 h后首次换液，弃去悬浮细胞. 随后每3 d换液，1 wk后传代. 将第3代细胞用于流式细胞仪检测. 浓集细胞到109/L后进行流式细胞仪检测. 细胞传至第3代时将其以2×107/L的细胞数分别转入各定向培养基中进行培养. 诱导培养2 wk后，对成脂诱导组进行油红Ｏ脂肪颗粒染色，; o. A8 @* z2 R# y+ M; }

+ S: W: X2 \* m( f+ R另外：0 B0 a% C; b5 a$ \

3 _2 T0 j0 Y( z; G" B现在脂肪干细胞缺乏特异的表面标志鉴定，各类文献提到脂肪干细胞表达阳性的标志物有：cd13，cd29，cd59，cd49e，cd73，cd90，HLA-ABC等。但表达阳性不代表具有特异性，所以要从标志物上鉴定脂肪干细胞还是很困难的，应该说不具有很强的说服能力。; ^$ a7 A8 v: `