如何让12孔板，24孔板等小孔径的培养板中细胞分布均匀

safflower

实验过程中经常要用到小孔径的培养板，本人在使用时经常遇到细胞分布不均匀的情况，集中在中间或周围，如何让12孔板，24孔板，96孔板等小孔径的培养板中细胞分布均匀，一直很头疼，不知各位有何高见？

yuhaoze

96应该没问题，24孔板和12孔板，加液体的时候不要让它旋起来，这样细胞就集中不到中间了。原理你懂了，怎么操作自己摸索摸索就知道了，慢点儿加，慢点儿混一混也可以。

hany2007

先在孔内加0.5至1ml培养基，再把细胞加进去。加好后，在水平桌面上前后左右各平移十次。然后在培养箱外至少放置15分钟后，再放到培养箱中培养。关键的诀窍是铺完板子后在培养箱外要放置一段时间。

holywater

种版时候先和新鲜培养液混匀再种即可解决

xiaopingzeng318

有两种加液方法，如果细胞怕损伤，在6孔板或十二孔板先加1ml或0.5ml的培养基，然后加混匀后的细胞液体，加的时候可以一滴一滴的加，每一滴的位置随意移动，如果细胞不是那么脆弱，可以把细胞都加在培养液里再加到板中。加完后，记住顺时针摇匀，再逆时针摇匀，往上、下、左、右各摇动几次既可。放在培养箱时注意看下，培养箱的板面是不是平的，不平的话放在平的地方。

zhouxiangya

混匀了再加，加完后上下左右平移混匀。

anminleiryan

根据我们的经验，细胞分布不匀有两个原因：
8 T- A9 g, x# B  @3 w) m1，由于添加细胞时，细胞在孔内的培养液内没有混匀，克服这类问题时认真把细胞混匀即可（提前在培养瓶皿以外就把细胞混匀，然后小心加入皿内即可）；
0 ^: d6 T; O3 x; A+ [" C8 Z2，其次是细胞培养室周围有较强的震源，细胞放入培养箱后，在这些震动的作用下，逐渐向皿的中部（或外周）集中。因为现在稍好一些的实验室细胞培养都在层流室内进行，层流室内有风机室、空气交换机等大功率的用电设备，这些设备震动很厉害，容易产生楼主所说的现象，较难克服。办法是脱离层流室，在一般无菌间进行操作，可能有所改善！

safflower

回复 hany2007 的帖子
7 F, P+ j% P7 E( k; G0 w8 d
3 m# F1 H. v" ~& F1 P关键的诀窍是铺完板子后在培养箱外要放置一段时间。为什么？

safflower

可能振动是一个原因。我每次加完后就按照上面所说前后左右摇动，可能幅度也太大。
4 m4 X: K7 \3 h9 z, z6 k8 t多谢大家！
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gact

safflower 发表于 2012-2-29 09:02
+ m! T7 P8 ~4 Y. x4 O回复 hany2007 的帖子
' |3 B7 _8 c" v8 f: E. t, G1 e: E, z( ], z6 Z
关键的诀窍是铺完板子后在培养箱外要放置一段时间。为什么？

; T& g" S. z$ e! F$ ]( G
同问，，