关于核酸 DNA/RNA抽提时候注意事项经验之谈

holywater

1.关于A260/A280 这个只要符合区间规定就可以了，没必要弄的很高。另外，水/TE做溶剂时候这个值也是有差别的，我的经验是水的话这个值偏低，TE的话偏高
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2.用水还是用TE？很多人会问这个问题。我可以回答：绝对是水！抽提的DNA要酶切，连接，转化，或者DNA测序。TE中的EDTA会干扰这些过程用的金属离子浓度，造成消化不良% j1 _- t( u# p
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3.如果是做realtime，要用反转录试剂盒里面提供的水。

zzc2211

第二个问题：用水还是用TE。我一直用TE，如质粒需长期保存，我用1×TE，如做酶切则用0.1×TE。在TE里面质粒较水稳定，适合保存。另外，提出的质粒浓度都不低，酶切所取体积都不太多，是否干扰酶切值得商榷。

safflower

回复 holywater 的帖子0 a; @  p, d3 F) ], i; `8 @& g# x* ~4 A

) L7 }7 M6 U, Q0 O4 t! `在提取基因组DNA的时候遇到这样的现象，加苯酚：氯仿抽提离心后，最上面那层出现冻状物，在吸取的时候很容易就把中间蛋白层吸起来了。
7 _0 I/ n& P. L请教一下，为什么会出现粘糊糊的冻状物，是糖分吗？大侠有没碰到过这样的现象？

aptx48

现在试剂盒里的洗脱液都只是tris溶液，我们自己做的时候用那个也不错，0.1×的TE也很好，DNA在纯水里容易不稳定，最好还是保存在缓冲液里。长期保存的话，抽成干粉最好，或者抽提后，用乙醇析出时，直接连乙醇冻-20，固态的DNA总比在溶液中稳定。; K* [& u5 ]& [0 U6 I* U4 B2 V
感觉那个黏糊糊的会不会是基因组DNA?细胞太浓了？

xiongjiedeng

我提一直用的是TE，第一次看到是用水的，算是开眼界了，但是TE干扰酶切，楼主有依据吗，做过对照实验吗？

mansnoopy

中间的糊状物不仅仅是糖分  还有蛋白

wuyannini

我做RAN的时候，也是一直用的是TE，而DNA则一般用水。我也有相同疑问，TE干扰酶切吗？依据是什么？是否做过有过这样的经验？