还是饲养层的问题

xxh83121

我用罗氏的丝裂霉素C处理细胞，浓度是10ug/ml作用了2h，过了几天发现细胞还是在生长，增加浓度和作用时间也没用，所以怀疑是丝裂霉素C出了问题。我用DMEM/F12培养液配的母液，放到-20冻存，第二天发现有许多紫色结晶，并且常温下还不溶，郁闷。大家都用什么牌子的丝裂霉素啊？怎么保存和用法？& }) N2 G$ A# e: d" U4 ~

xxh83121

谢谢大家，仆照此办理

mansnoopy

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9 J% n* B9 C; Z: w母液有紫色结晶是会出现这个现象的，没有问题。母液一般负20保存，工作液4度即可，注意避光，防污染

lcxlorna

我们从医院买的海正药业的人用丝裂霉素，20ug/ml  作用2-2.5h，效果还行；sigma的也用过，不过两者都是用PBS溶解的，过滤分装后，浓储-20冻存，用时用培养液稀释即可；处理过的细胞最多用一周，浓度大了细胞大量死亡，小了控制不住生长；所以不管什么厂家的货，自己用前先做个小实验，不同时间，浓度交叉处理MEF，做生长曲线或用MTT法测OD得出这批货的最佳浓度，时间等。

shangchunhua

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7 _6 k6 \% G: Q( l( j, r我也用罗氏的MMC，10ug/ml处理3h，效果还是不错的

xxh83121

我认为是proliferation，因为细胞底面在逐渐汇合，我已经放弃了这个板子0 G* b& \* j/ P/ |- Z. o9 v

houbara

growth or proliferation? Mototic arrested cells still be able to grow in size but not proliferate.

xxh83121

担心紫色结晶会影响浓度，因为罗氏和sigma的价钱差太大，所以想sigma是不是不会出现这种问题

varing

细胞还在长？可能是MEF贴壁后延伸吧，导致板子看起来很满，我的经验是MEF贴壁时间长了后就很平了，大概4-5天就贴的很平，看起来很满。- a, q( W) f4 o+ R2 y$ f6 M
配的母液有紫色结晶很正常。加入培养基稀释后能很好的溶解，不会出现的不溶的状况的。8 D! ]8 \9 T# \
你的保存和用法应该是没问题的，母液要-20度避光保存就行了，用时稀释，避免反复冻融。