请教大家反转录PCR（RT-PCR）的结果怎样分析

wangfang

请教大家反转录PCR（RT-PCR）的结果怎样分析，RT-PCR的准确度怎么样，什么地方会对结果造成很大的影响呢，例如一个不表达的基因被批出带了，这有可能吗

holywater

这年头很少有人做RT了，还要摸条件还要避免二聚体，直接上realtime吧

linzi214

注意引物是不是特异的。RT-PCR只是定性的观察，PCR的循环数要摸索建立，而且差异大的话才能做出来效果，差异小的话或要半定量最好用real-time PCR。

linzi214

注意引物是不是特异的。RT-PCR只是定性的观察，PCR的循环数要摸索建立，而且差异大的话才能做出来效果，差异小的话或要半定量最好用real-time PCR。

wangfang

RT-PCR会出现本来细胞内不表达的基因却被检测到吗

linzi214

“细胞内不表达的基因”具体是指什么？如果因为甲基化等表观遗传调控机制导致该基因没有检测出来，那么由于处理等原因导致基因表达模式发生改变，是有可能检测出来的；如果该基因有几个变异体或同工酶，由于序列相似或有部分共同序列，引物不特异的话，也可以扩出条带；再者如果基因检测过是缺失但还可以扩出条带，要考虑是不是RNA抽提时污染了

lingchen04

可能出现不表达的基因也扩出条带。注意DNA的污染，有些RT试剂盒里面带有DNAase，这个就可以排除DNA污染。还有就是，可能实验中，如果与人的亲缘关系比较近的，如果一些皮屑不小心混进样品，会出现假阳性。

yuju1987

是得啊

taidejun

这个是比较麻烦，用灰度值

zx314

不是说pcr扩增并不是均一稳定的扩增吗？我记得有讲座说只有real-time ct值才能说明问题。