关于 使用流式细胞仪分选人类女性生殖干细胞

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回复 leisong12 的帖子: ?( D* Q; i% Z/ U
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     对啊。。。我同样纠结于此啊！！！！我还在想我是不是关于流式的知识太少了，所以理解不了，问了好几个同学，都搞不清楚这是怎么回事。握个手先！至少知道不是我一个人被作者弄晕了。。呵呵   谢谢这位朋友了！ 不过作者说图中 那个Anti-rabit-APC  是用来排除自发荧光的，不知道改如何理解。。

cneagle66

- {  @0 o1 y+ K6 w
( `% B/ v! q) p( p5 e6 v对于这3张图，发表些自己的看法。
, k0 ?. l, P4 W2 C0 x对于活细胞，从染色看，第一张只加COOH端抗体-APC，所以按照文字，应该是细胞在APC纵轴上移，（而后作者说是印刷错了，真的么？）中间张图，只加NH2端抗体，488几乎无细胞染色，所以从前两张图上看，应该是COOH端可以在胞膜上检测出来，而用NH2端抗体检测不到阳性细胞。所以，我觉得作者给你回信说是印刷错误，也不好解释这两张图。
# e1 q) q0 S* u+ e( F8 ?! D- q5 z第三张纯粹是穿孔染色的对照。
' |" D7 A7 d/ u6 S% C0 p- Y他用这两个颜色染色，就用他们做纵横轴，我觉得没有什么问题。
8 |! {) h& ~9 C9 _9 V6 P4 u. j$ R阴性区域为什么那么小，我想应该是用无染色的对照划定的区域，不影响结果判断。
# P; h8 R: g8 ]9 ?7 e3 {8 ^0 p' h" d( }6 c4 Q+ |# _4 x& ]
结论，图的确有问题，怎么解释只有作者知道，暂时相信他的结论吧，自己重复实验以后才知道。: _' o0 w7 D( l+ S7 a3 l8 C, |

4 a$ ]# @& o8 L另外，若有新的发现，还请来这里告诉大家一声，一起进步啊！

leisong12

"那个Anti-rabit-APC  是用来排除自发荧光的，不知道改如何理解"       这个也有可能，我没有调查过该细胞自发荧光光谱范围，但是可以单看APC标记，发射波长660nm, 个人认为动物细胞自发荧光不会达到该值，所以用APC标记的抗体检测不会与自发荧光重叠。Alexa Fluor488发射波长519，PE是575，很可能与细胞自发荧光发生重叠。但是实验都是会设置对照的，应该没有这个问题啊，真不知道作者想说什么？

chenchunlei

我这周就讲这篇文章，对于这个抗体分选的OSCs图也看不懂，本人觉得figure1中的C图COOH分选的阳性细胞应该在阴性细胞的左上方