求助：细胞膜蛋白免疫荧光染色问题

yyshpy

我做免疫荧光染色，同时标记两个蛋白，一个定位在膜上，一个定位在胞浆中，现在遇到了问题，主要在固定后的通透上，通透会损伤细胞膜，有没有人知道柔和的通透剂有哪些，怎么用？既对细胞膜损伤较小，又能保证抗体能进入细胞质？
) t/ j& u5 @% Z9 ]$ S: N此外，关于免疫荧光染色，大家都有什么提醒、注意事项什么的，希望能不吝赐教啊

yyshpy

版主，把这个帖子给推一下吧，确实需要帮助，难度挺大的

qilan2012

不知道你要用哪种抗体染胞质的哪种抗原，有些比较小的抗体是可以直接穿透细胞膜的

inspiration8

免疫荧光的注意点很多，最从固定、打孔、染色等等对不同细胞或组织作用时间不一，最好看看同种细胞或组织已发表文献。

yyshpy

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标签抗体myc,不知道听过没,给点建议

qilan2012

不好意思，没用过标签抗体myc，查资料也没找到...如果你还没做的话可以先试一下双染效果怎么样。还有tritonx100是我们常用的打孔剂，它的打孔原理是破坏细胞膜的脂质双层，对膜蛋白并未提到破坏作用，可以的话你可以一个加triton，一个不加试一下