人脐带间充质干细胞过早老化的问题

cactus006

大家好，我养的hUCMSCs，组织贴壁法培养的，细胞长到P2代就开始变得扁平，粗糙，没有立体感，感觉像是老化了，一直找不到原因，我现在的培养条件是L-DMEM+hyclone北美来源的FBS，不知道是不是FBS的问题，请大家帮忙分析一下原因，并帮我推荐一款FBS的货号，谢谢了！
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he_liang

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0 H' L6 W* b' P我问了一下别的朋友，他们用的是低糖的DMEM，你可以试试

相文

我的做出来的原代就很粗糙，没有立体感，细胞核很大，用0.025%的胰酶消化10分钟都下不来，我用的是L-DMEM+GIBCO血清20%，里面加了vc，我的组织块剪的很小的试过，剪大的也试过。每次都剪了先不加培养基半小时让他贴稳，然后再加培养基。五天第一次换夜观察，但每次做出来细胞很少，细胞核很大而且消化不下了。我用的是大皿。我现在考虑1：胰酶浓度不够？2；换液时间长？& z2 [) O" {! Q5 \
3，血清不好？4：培养基里还需加点什么？5，不该用大皿？真头疼，各位做出来了的麻烦指教指教，谢谢！
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cactus006

回复 he_liang 的帖子  k9 t' u; L# o1 {* d

. O8 S, x3 n5 p8 e6 x" k" q哦，这样啊，细胞不一样需求的营养也不一样

he_liang

回复 cactus006 的帖子0 S5 D1 Z. P" p$ G1 ], ^- S- p

5 I2 ?8 o* ^; Q' F状态挺好的，我养的是普通的成纤维细胞

cactus006

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你好，你们实验室的只用基础培养基+FBS么，细胞状态怎么样呢？

he_liang

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* Z6 z! J) ]( s' H6 {- p2 m很抱歉哦，我养的不是hUCMSCs，不过我看过一些文献，要加一些bFGF什么的，好几种因子

喇叭shopping

细胞培养太密会造成过早老化，应在培养50%-60%贴壁时进行传代。

yangwy028

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; u( A. b2 W* d2 T$ u; }. m黑胶虫污染的时候镜下就可以看到那些不规则蠕动的生物，这个你完全可以自己鉴别的

cactus006

回复 he_liang 的帖子& ~/ u% Y) y2 T+ s. Q& V5 ?
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您好，非常感谢您的经验分享！请问您养的也是hUCMSCs么，您用南美血清的时候还添加了其他生长因子么？5 m0 P* f8 Q8 o  Z