oct4 基因在普通细胞中表达吗

jefferson

是做的什么PCR，这些基因在HDF细胞中是不表达的，或者，表达量相当低，普通PCR或者RT-PCR应该都难以检测的到。* t# m& \+ r& @/ a
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但在一些Paper里，在做ips的鉴定时，用Q-PCR检测多潜能性基因的表达量时，有的是用HDF作为参比的。就是说，扩增HDF细胞中的这些基因，包括OCT4,NANOG等作为标准，其结果定义为1。这样的话，说明在HDF细胞中是可以扩增到的，但我扩了两次，量太低或者没扩出来。

jefferson

回复 fanmihu1987 的帖子. o! R6 }& W; C+ N7 V( L5 m* s
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很有可能确实是表达的，尤其是在胎儿的细胞里。
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想起来以前做过一次RT-PCR，在成人HDF细胞中也扩出了NANOG。
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5 P) @6 s5 G- _  N- T% e" A# {. ^是否是这些基因在成体细胞也表达，但量较低而已？

jefferson

由于来源于胎儿的HDF，细胞污染是应该考虑的一个问题。
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; F# O/ S, H6 L2 r9 `: ~- U5 m# t此外，有文献报道，OCT4, NANOG, 以及另一种多潜能性基因Stella都存在假基因。OCT4有6种假基因，NANOG有10种。此外，有文献报道NANOG基因在成体组织中也有表达。因此利用RT-PCR检测的时候，引物设计就很重要了，要避免假基因对结果产生的干扰。所以出现这种情况，应该是所用的引物扩出了假基因。
7 Y0 u* u7 v, P* h" V; g7 R& k( L. }5 ^( [" t' H
附两篇相关的文献以供参考，希望对你有帮助。7 |5 l1 ^- K' a) O2 L
; X- T6 P$ H8 o. |  }$ E$ a) b
1. Multiple retropseudogenes from pluripotent cell-specific gene expression indicates a potential signature for novel gene identification. J Biol Chem. 2005 Feb 25;280(8):6265-8. Epub 2005 Jan 6.
! v* X4 I. P  G
  x/ H. v4 B7 Y" O' ]( p2. Identification, cloning and expression analysis of the pluripotency promoting Nanog genes in mouse and human。Dev Dyn. 2004 May;230(1):187-98.

jefferson

fanmihu1987 发表于 2012-3-28 16:04 , d: K2 ^$ P2 ~4 R. s( a
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+ Z1 W; ?  M. s
1 w; o% }7 ^9 z* h0 C谢谢您的回答，还想请教细胞污染指的是什么？

2 f  k& U$ e0 C7 k
不知道你的胎儿HDF是自己分离的，还是细胞株* U: N% `4 Q- E3 h, c

  X7 @+ N- n5 L  u$ [2 v+ @由于OCT4在干细胞或者生殖系细胞中都高表达，NANOG在一些成体组织中也有表达，因此如果是自己分离的胎儿HDF，有可能一起分离到了出HDF之外的其他组织细胞，而这些细胞或有可能就表达OCT4或NANOG。2 x6 K  _; B" @( A

2 d- `  W$ T0 G) ?不过个人认为，RT-PCR引物设计不当，扩增出假基因的可能性很大，建议看下那两篇文献。