我的做出来的脐带间充干原代就很粗糙，没有立体感

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我的做出来的脐带间充干原代就很粗糙，没有立体感，细胞核很大，用0.025%的胰酶消化10分钟都下不来，我用的是L-DMEM+GIBCO血清20%，里面加了vc，我的组织块剪的很小的试过，剪大的也试过。每次都剪了先不加培养基半小时让他贴稳，然后再加培养基。五天第一次换夜观察，但每次做出来细胞很少，细胞核很大而且消化不下了。我用的是大皿。我现在考虑1：胰酶浓度不够？2；换液时间长？+ G6 i4 Z- p6 d. C/ @8 a& g6 K  ^
3，血清不好？4：培养基里还需加点什么？5，不该用大皿？真头疼，各位做出来了的麻烦指教指教，谢谢！: s( P7 I1 ~% r. @. m$ I

喇叭shopping

我没做过脐带见充质干细胞，但是我觉得你的胰酶浓度不够，我见过国外书上用的是0.05%胰酶+0.53m MEDTA。EDTA在加速胰酶消化中还是很重要的。但是消化后要离心，因为血清不能终止EDTA的消化作用。

Demon_CN

血清浓度过高了吧!一般是DMEM+10%FBS血清用好点的像Gibco的吧!酶浓度减半用吧

Demon_CN

忘了说用盐水或者Pbs洗两 次!否则你消化半小时也下不来
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wcfeng88

去除培养液后，可以试着先用胰酶润洗一遍，吸出润洗液后再加胰酶消化。

快乐成长

胰酶浓度太小了。0.125~0.25%都没问题。

SKC-SFC

从你的描述来看，你的脐带在原代是采用的贴块法。原代贴块培养有几个重要的方面需要注意，一是组织块不要太大，尽量剪小，组织块间不要粘连，而且在贴块的时候可以加少许培养基润润组织，对侧面补充培养基，12小时后翻瓶。继续培养。

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我试试 ，谢谢各位

andylee824

还有一个问题，你用胰酶消化的时候，胰酶最好用37℃水浴，消化时最好放37摄氏度培养箱。
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心蕾

胰酶里面加EDTA了吗？不加EDTA细胞不好消化，感觉你的胰酶浓度也有点低，我们用0.25%的胰酶和0.05%EDTA的混合物，效果还不错，原代的细胞应该透亮，立体感很强。