求教：关于细胞电转染的一些问题

cmbjtu

最近要做电转染，查了一些资料，看到说是质粒的量和细胞数量比例也是影响转染效率的一个比较大的因素，是不是说质粒加多了也不好呢？还有就是普通的高糖DMEM可否直接用作电转染呢？亲们，谢谢啊！

lxm5668

电转染的原理是通过高压在细胞膜上瞬间打孔，使质粒穿膜而入。这种方法电压是最重要的因素，否则细胞都开花了，像是嘣的爆米花。质粒量的多少我记得比脂质体转染要多，加太多也没用。主要是电压要摸索好。直接在DMEM中就行。

懵懂干细胞

电转原理楼上的已经说了 我说一下我的经验吧，先声明一下我用的是ES细胞和线性化质粒一起做的电转，首先你要选择处于指数生长期的细胞，为了保持电转后的细胞存活率，第二，细胞和质粒的比例我用过30ug-80ug：106-107都行，细胞与质粒比是影响电转率的重要因素，但不是影响电转后成功与否的最重要因素，细胞或质粒少一点就是阳性克隆少一点，筛选任务重一点，最重要的因素是电转的条件，而电转条件中最重要的因素是电转仪参数的设定，脉冲时间过长细胞直接大部分死亡，细胞质物质外流，到时候整个培养皿都会很黏稠，细胞根本无法生长，这个情况我遇到过几次，再就是电转缓冲液离子浓度，太低太高都不行。
# G  j" H3 w9 k3 f给你附上一篇应其龙教授的文献 参考吧
! V& q. |* k9 x$ u$ i Production of p53 gene knockout rats by homologous recombination in ESCs.pdf (609 KB)

2012-4-10 09:47 上传

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懵懂干细胞

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; R& U. p* q2 }# H/ v
1 b0 G3 n. m- F) e- T# j电压一般现在的电转都是用200V，所以200V可以用做参考数字

ssyt

电转染很方便的说，好久好久没做过，就当复习了~~

chunlanchen

我用的是小鼠ES，电转时细胞2000万，质粒25ug，230V，500uF

guokeliuhen

回复 lxm5668 的帖子' u  J0 y, H* w5 U# C' _

" s+ x1 K! z2 j& T: G电转染仪都有配套的试剂盒的，哪能随便用培养基呢，就是脂质体转染还要用“双无”培养基呢，我们实验室的两个品牌的都是有专门试剂盒的，不过听上海的同学说，他们实验室买了一个不用试剂盒的电转染仪好像是日本产的，莫非楼上将的就是这个？

fish_zbw1985

我们实验室买的是invitrogen出的电转仪，有配套的试剂盒，挺方便的

645449165

最近看了一些这方面的资料，感觉不同的细胞差异太大了, y4 k. j9 A& N2 k; S; ^3 g